ELISA檢測結果準確可靠的必要條件

的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件.本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點,珠式、管式及磁性球ELSIA,國外試劑均與特殊儀器配合應用,嚴格遵照規定操作,提高檢測結果的準確性.

可用作ELISA測定的標本十分廣泛,體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份.有些標本可直接進行測定（如血清、尿液）,有些則需經預處理（如糞便和某些分泌物）.大部分ELISA檢測均以血清為標本.血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清.制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得.除特殊情況外,在醫學檢驗中均以血清作為檢測標本.在ELISA中血漿和血清可同等應用.
血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色.
    血清標本宜在新鮮時檢測.如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應.如在冰箱中保存過久,其中的可發生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深.
    一般說來,在5天內測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存.凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩.混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測.反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存.保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑

按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑.ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的.自配的緩沖液應用pH計測量較正.從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用.試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存.
    在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物.加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產生氣泡.
    加標本一般用微量加樣器,按規定的量加入板孔中.每次加標本應更換吸嘴,以發生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣.有此測定（如間接法ELISA）需用稀的血清,可在試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣.也可在板孔中加入稀釋液,再在其加入血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和.加酶結合物應用液和底物用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成.

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