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上海博湖生物科技有限公司
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原代細胞的傳代培養方法步驟
2024-12-17 閱讀(175)
原代細胞是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞并在體外進行模擬機體培養的細胞,稱為原代細胞。
一般認為,培養的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。在人工條件下使其原代細胞生存、生長、繁殖和傳代,進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞I程等問題的研究。
那么關于原代細胞的傳代培養,我們應該怎么做呢?一般有以下兩種方法：
一、貼壁細胞的消化法傳代
1、吸除或倒掉瓶內舊培養液。
2、加入1ml左右消化液(yi蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動培養瓶,使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、消化2-5分鐘后把培養瓶放置在顯微鏡下進行觀察,發現原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時,棄去消化液,加入培養液終止消化。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸波,分別接種到另外兩到三個培養瓶中,置37°C培養箱中繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。
二、懸浮細胞的傳代
1、直接傳代
①讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3.
②用吸管吹打形成細胞懸液后,分別接種到另外兩到三個培養瓶中，置37*C培養箱中培養。
2、離心法傳代
?、賹⒓毎B同培養液一并轉移到離心管內 ,離心800-1000rpm , 5分鐘。
②去除上清,加新的培養液到離心管內,用吸管吹打使之形成細胞懸液。
?、蹖⒓毎麘乙悍謩e接種到另外兩到三個培養瓶中,置37*C培養箱中培養。
