細(xì)胞實(shí)驗(yàn)技術(shù)-細(xì)胞融合
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?br />掌握細(xì)胞融合原理、應(yīng)用 PEG 融合細(xì)胞的方法以及細(xì)胞融合率的計(jì)算。
【實(shí)驗(yàn)用品】
一、材料 雞紅細(xì)胞
二、器材和儀器：顯微鏡、離心機(jī)、水浴箱、刻度離心管、試管、載玻璃片、蓋玻片
三、試劑 50％PEG（MW4,000）、Hanks 液（pH7.4）
【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】
一、原理
細(xì)胞融合（Cell fusion），即在自然條件下或用人工方法（生物的、物理的、化學(xué)的）使兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的過程。人工誘導(dǎo)的細(xì)胞融合，在六十年代作為
一門新興技術(shù)而發(fā)展起來(lái)。由于它不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合，也能產(chǎn)生種間細(xì)胞的融合，因此細(xì)胞融合技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域。
細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多．常用的主要有滅活的仙臺(tái)病毒（Sendai virus），聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）和電脈沖。目前應(yīng)用zui廣泛的是聚乙二醇，因?yàn)樗椎谩⒑?jiǎn)便，且融合效果穩(wěn)定。PEG 的促融機(jī)制尚不*清楚，它可能引起細(xì)胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團(tuán)發(fā)生結(jié)構(gòu)重排。
二、方法
（1）取新鮮雞血以 0.85％生理鹽水制成 10％的懸液。
（2）稱取 0.5 克 PEG（MW=4,000）放入試管內(nèi)，在酒精燈上融化之，迅速加入 0.5ml 預(yù)熱的 Hanks 液混勻制成 50％的 PEG 溶液。放入 37℃水浴中待用。
（3）取上述 10％的雞紅細(xì)胞懸液 1ml 放入離心管中，再加入 5ml Hanks 液混勻，然后以 1,000rpm 離心 5 分鐘，小心棄去上清，用指彈法將細(xì)胞團(tuán)塊彈散。
（4）取上述 50％PEG 溶液 0.5ml，在 1 分鐘內(nèi)滴加到雞紅細(xì)胞懸液，邊加邊輕輕搖動(dòng)混勻。待 PEG 全部加入后靜置 1 分鐘左右。此全部過程都要求在 37℃水浴內(nèi)進(jìn)行。
（5）緩慢滴加 9ml Hanks 液以終止 PEG 的作用，在 37℃水浴內(nèi)靜置 5 分鐘。
（6）離心棄上清后，取一滴融合后的細(xì)胞懸液滴片，加蓋片鏡檢。
三、結(jié)果觀察
在高倍鏡下可以看到有兩個(gè)或兩個(gè)以上的雞紅細(xì)胞膜融合在一起，形成一個(gè)異核體細(xì)
胞。要注意辨別融合細(xì)胞與重疊的雞紅細(xì)胞。
