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大鼠可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒

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更新時間:2016-04-28 05:41:19瀏覽次數:434次

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“大鼠可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒"標本要求 :
標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

大鼠可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒 組成:

試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1 1  
封板膜 2片(48 2片(96  
密封袋 1 1  
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品 0.5ml×1 0.5ml×1 2-8℃保存
標準品稀釋液 1.5ml×1 1.5ml×1 2-8℃保存
酶標試劑 3 ml×1 6 ml×1 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1 6 ml×1 2-8℃保存
顯色劑A 3 ml×1 6 ml×1 2-8℃保存
顯色劑B 3 ml×1 6 ml×1 2-8℃保存
終止液 3ml×1 6ml×1 2-8℃保存
20倍濃縮洗滌液 20ml×1 30ml×1 2-8℃保存
大鼠可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1)固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。
(2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
(3)酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是雙氧水在臨用前加入。

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