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雙抗夾心ELISa的步驟

閱讀：326發(fā)布時(shí)間：2015-1-8


原理:

（1）單抗包被-抗原-酶標(biāo)二抗-底物顯色。
本法首先也是用特異性抗體包被于固相載體，經(jīng)洗滌后加入含有抗原之待測(cè)樣品，如待檢樣品中有相應(yīng)抗原存在，即可與包被于固相載體上的特異性抗體結(jié)合，經(jīng)保溫孵育洗滌后，即可加入酶標(biāo)記特異性抗體，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色進(jìn)行測(cè)定，底物降解的量即為欲測(cè)抗原的量。
    （2）單抗包被-抗原-二抗-酶標(biāo)二抗-底物顯色。(改良雙抗體夾心法)
本法首先是將特異性抗體a包被于固相載體，經(jīng)洗滌加入含有欲測(cè)抗原之待檢樣品。經(jīng)孵育洗滌后再加一次未標(biāo)記的特異性抗體b，而這次加入的抗體b于*次包被于固相載體上的特異性抗體a對(duì)被測(cè)抗原來說都是特異性的，但不是用同種動(dòng)物免疫制備的，否則可出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。經(jīng)孵育洗滌后，再加酶標(biāo)記抗b抗體，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色進(jìn)行測(cè)定。這種方法與雙抗體夾心法不同之處是多加了一層抗體。

因此，放大的倍數(shù)更高，故比雙抗體夾心法更加靈敏。同時(shí)避免標(biāo)記特異性抗體，而另一優(yōu)點(diǎn)是只要標(biāo)記一種抗抗體，即可達(dá)到多種應(yīng)用。



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