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科興技術梳理細胞的所有冷凍方法

閱讀：383發布時間：2016-1-4

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。

細胞冷凍方法：

1.４℃以下慢慢地冷凍，保存于液態氮中（-196℃）。

2.37℃快速解凍。

3.保護劑（抗凍劑）：添加甘油（glycerol）（ I0 %左右）或dimethy1sulfoxide （DMSO）（ 5- 10% ）。

4.有些細胞如果采用上述的方法時，無法得到高的存活率。此時，則必需考慮可能傷害細胞的機制，添加劑之作用等而來找出適當的條件來修正。

備注：經過冷凍保存后的細胞，其生存率會下降，冷凍時之冷卻速度，保存溫度，解凍時升高溫度的速度以及添加之冷凍保存液之種類、濃度等都可影響細胞存活率。

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