在臨床實(shí)踐中，原發(fā)性免疫缺陷病(PID)的準(zhǔn)確診斷通常很困難，因?yàn)榕R床癥狀多樣且當(dāng)前的診斷過程復(fù)雜。
原發(fā)性免疫缺陷病是一組由免疫系統(tǒng)的遺傳缺陷而引起的疾病，大約有200多種，其特點(diǎn)是嚴(yán)重、反復(fù)出現(xiàn)且危及生命的感染。目前的檢測方法包括細(xì)胞毒性分析和流式細(xì)胞術(shù)。
遺傳檢測能協(xié)助醫(yī)生確定治療策略。然而，與PID相關(guān)的基因有200多個(gè)，往往不太清楚應(yīng)當(dāng)檢測哪些基因。不同基因中的突變可能導(dǎo)致類似的表型，而相同基因中不同部分的突變卻可能出現(xiàn)不同的表型。重要的是，實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證的檢測有時(shí)只覆蓋一小部分致病基因，因此檢測需要被分到不同的實(shí)驗(yàn)室。
研究人員利用QIAGEN的FlexiGene DNA Kit從全血中提取DNA。對于某些患者，血液也利用PreAnalytix的Paxgene Blood RNA*來采集。然后他們利用Paxgene Blood RNA Kit來提取RNA，其中500 ng用于羅氏First-strand cDNA synthesis for RT-PCR的cDNA合成。研究人員設(shè)計(jì)出靶向富集分析，覆蓋與PID相關(guān)的179個(gè)基因的所有外顯子。隨后由GATC Biotech在Illumina的GAIIx系統(tǒng)上開展高通量測序。
研究人員能夠?qū)⒁恍┎∫虿幻鞯牟±c已知的基因突變相匹配。兩名個(gè)體帶有STAT3基因的突變，兩名帶有lambda 5(IGLL1)基因的突變，還有一名帶有RNF168基因中的兩個(gè)不同突變。
根據(jù)這項(xiàng)研究的結(jié)果，作者建議PID的診斷分兩個(gè)階段：首先使用相對便宜且快速的靶向分析，它能解釋大多數(shù)疾病，之后對此分析不能分辨的病例進(jìn)行全外顯子組或全基因組測序。
分析技術(shù)讓診斷PID的多重檢測更加有用。“利用第二代HaloPlex設(shè)計(jì)，99.5%的目標(biāo)區(qū)域被覆蓋，而現(xiàn)有分析為98.6%。再加上更好的序列覆蓋度和讀取深度，這將大大改進(jìn)分析的性能，
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