一、實驗原理 考馬斯亮藍（CBB）測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種?？捡R斯亮藍在游離狀態下呈紅色，zui大光吸收在488nm;當它與蛋白質結合后變為青色，蛋白質—色素結合物在595nm波長下有zui大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用于蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍結合在2min左右的時間內達到平衡，完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h內保持穩定。該法試劑配制簡單，操作簡便快捷，反應非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質含量，測定蛋白質濃度范圍為0～1 000μg/ml，是一種常用的微量蛋白質快速測定方法。 二、實驗過程 1.準備所需的藥品和儀器。 2.計算所需配制的溶液的量。 先配制1 mg/ml的牛血清蛋白（BSA）母液，再往母液中加入磷酸緩沖溶液（PBS）配制一組濃度分別為1.0mg/ml ，0.8mg/ml，0.6mg/ml ，0.4mg/ml ，0.2mg/ml的BSA溶液，再將這組溶液稀釋10倍，得到一組濃度分別為0.10mg/ml ，0.08mg/ml，0.06mg/ml ，0.04mg/ml ，0.02mg/ml的BSA溶液。計算*步稀釋各組需要的BSA溶液及PBS溶液的體積。 3.具體操作過程。 用天平稱量1.00g牛血清蛋白（BSA），溶于去離子水中，配成100ml的溶液，溶液的濃度為10mg/ml。用移液槍分別取100ul，80ul，60ul，40ul，20ul的BSA溶液，置于1.5ml的EP管中，再分別加入900ul，920ul，940ul，960ul，980ul的磷酸緩沖溶液（PBS）配成1ml的溶液，震蕩使溶液混合均勻。得到一組濃度分別為1.0mg/ml ，0.8mg/ml，0.6mg/ml ，0.4mg/ml ，0.2mg/ml的BSA溶液。 移液槍分別移取100ul剛配好的一組BSA溶液，置于1.5ml的EP管中，各加入900ul的PBS溶液，震蕩使溶液混合均勻。得到一組濃度分別為0.10 mg/ml ，0.08mg/ml，0.06mg/ml ，0.04mg/ml ，0.02mg/ml的BSA溶液。另外量取1ml的PBS溶液（BSA溶液濃度為0 mg/ml）作對照試驗。 用移液槍分別移取50ul配好的一組BSA溶液，滴加到孔板中，再分別加入200ul的考馬斯亮藍（CBB）。靜置10min后，用酶標儀測得這組BSA溶液的吸光度。 | 
