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2017年ELISA試劑盒加樣流程

閱讀:486發(fā)布時間:2017-1-16

    ELISA試劑盒屬固相免疫測定,抗原、抗體的只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標(biāo)本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗的機會,只需zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐,因此需經(jīng)分散才干到達反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的也相同如此。這就是為何ELISA試劑盒反響老是需求必定時刻的溫育。
    有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液,再在其間參加血清標(biāo)本,然后在微型震動器上震動1分鐘以確保混和。加酶物使用液和底物使用液時可用定量多道加液器,使加液進程敏捷完結(jié)。在ELISA檢查試劑盒中通常有兩次抗原抗體反響,即加標(biāo)本和加酶物后。抗原抗體反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時刻,這一保溫進程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA檢查試劑盒中似不恰當(dāng)。
    ELISA試劑盒溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體的合適溫度。在樹立ELISA方法作反響動力學(xué)研討時,實驗標(biāo)明,兩次抗原抗體反響通常在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)品的生成可達高峰。為加快反響,可進步反響的溫度,有些實驗在43℃進行,但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為*,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中,以形成zui多的沉積。但因所需時刻太長,在Elisa試劑盒中通常不予選用。


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