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技術(shù)文章

凍存細胞復蘇的步驟和注意事項

閱讀：6141發(fā)布時間：2017-7-3

在實際操作中，凍存細胞要進行復蘇，再培養(yǎng)傳代。復蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結(jié)晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細胞。

一、凍存細胞復蘇的操作步驟

（1）佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。

（2）迅速放入 38℃水浴中，并不時搖動，在 1 分鐘內(nèi)使其*融化，然后在無菌下取出細胞。

（3）在 1000r/min速度下離心 5～10 分鐘，棄去上層液，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，接種濃度 1×109/L，置 37℃溫箱靜置培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長情況。若細胞密度較高，及時傳代。或無需離心直接將細胞加入瓶中，并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng) 12～24 小時后，充去上清，換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

二、凍存細胞復蘇的注意事項

（1）從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存，但為對數(shù)生長期細胞。在凍存前一天換一次培養(yǎng)液；

（2）將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷；

（3）凍存和復蘇用新配制的培養(yǎng)液。

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