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禽流感病毒RT-PCR檢測試劑盒

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地廣州市

聯(lián)系方式:全國東查看聯(lián)系方式

更新時(shí)間:2017-06-25 16:01:16瀏覽次數(shù):345次

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經(jīng)營模式:生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品:127條

所在地區(qū):廣東廣州市

聯(lián)系人:全國東 (銷售)

產(chǎn)品簡介

禽流感病毒RT-PCR檢測試劑盒,說明書

詳細(xì)介紹

                 禽流感病毒RT-PCR檢測試劑盒使用說明書

產(chǎn)品咨詢:

【試劑盒簡介】

      禽流感病毒RT-PCR 檢測試劑盒,采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR )技術(shù)檢測禽組織、分泌物和排泄物中所有亞型的AIV,適用于AIV的檢測、診斷和流行病學(xué)調(diào)查

【試劑盒原理】

      利用吸附柱提取RNA作為模板,在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下,以引物為起點(diǎn)合成與RNA 模板互補(bǔ)的cDNA鏈;然后在DNA 聚合酶的作用下,經(jīng)高溫變性、低溫退火和中溫延伸的多次循環(huán),使特異DNA 片段的拷貝數(shù)放大數(shù)百萬倍。將擴(kuò)增的DNA 片段進(jìn)行電泳、染色后,在紫外燈下,肉眼可見DNA 片段的擴(kuò)增帶。

【試劑盒組份】

1. 裂解液

8mL

N. 陰性對照

500μL

2. BME

85μL

6. 吸附柱和收集管

12

3. 異丙醇

8mL

7. 0.2 mL 薄壁PCR 管

15

4. 洗滌液

15mL

8. 50 倍TAE 電泳緩沖液

20mL

5. 洗脫液

500μL

9. 染色液

20μL

P. 陽性對照

500μL

10. RT-PCR 反應(yīng)液A

220μL

 

 

11. RT-PCR 反應(yīng)液B

16μL

注:塑料袋內(nèi)試劑(陽性對照、RT-PCR反應(yīng)液A和B)-20 凍存,裂解液2-8冷藏,其他室溫保存。

【注意事項(xiàng)】

1.各種事件請?jiān)谝?guī)定的溫度保存。

2.本試劑盒有效期為6個月,不要使用超過有效期限的試劑,試劑盒之間的組分不要混用。

3.所有試劑應(yīng)在規(guī)定的溫度儲存,使用時(shí)拿到室溫下,使用后立即放回。

4.保存-20℃的試劑使用前請*融化,瞬離15s,使液體全部沉于管底,放于冰盒中,吸取液體時(shí)移液器吸頭盡量在液體表面層吸取。

5.嚴(yán)格按試劑盒說明書操作可以獲得的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)等全部過程必須精確。

6.RNA提取過程中,應(yīng)戴口罩、勤換手套,盡量縮短操作時(shí)間。

7.所有接觸病料的物品均應(yīng)合理處理,以免污染實(shí)驗(yàn)室。

【操作方法】

一、樣品制備

1樣品采集:病死或撲殺的禽,取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織;待檢活禽,用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物,置于50%gan油生理鹽水中,2~8 保存。(要求送檢病料新鮮,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。)

2樣品處理:

2.1 組織樣品的處理:稱取組織0.1g于研磨器中磨碎,再加1mL生理鹽水繼續(xù)磨至無塊狀物;然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5 mL滅菌離心管中,8000 rpm離心2 min,取200 µL上清于1.5 mL 滅菌離心管中。

2.2 全血樣品的處理:待血凝后取200 µL血清于1.5 mL 滅菌離心管中。

2.3 陽性對照的處理:混勻后,8000rpm離心20min,取 200 µL上清于1.5 mL 滅菌離心管中。

2.4 陰性對照的處理:混勻后取200 µL于1.5 mL 滅菌離心管中。

二、病毒RNA的提取

1. 往裂解液中加入77.6μL BME,充分混勻。(加入了BME的裂解液請存放4℃保存)

2. 取已處理的樣品、陰性對照和陽性對照,分別加入600µL裂解液,充分顛倒混勻,室溫靜置10min 。

3. 加入600µL異丙醇,顛倒混勻。

4. 吸取650μL混合液轉(zhuǎn)入吸附柱中,12,000 rpm 離心45S,棄去收集管中液體,套回收集管。

5. 重復(fù)步驟4。

6. 向吸附柱中加入600µL洗滌液,12,000 rpm 離心45S,棄去收集管中液體,套回收集管。

7. 重復(fù)步驟6。

8. 空柱12,000rpm 離心2min。

9. 將吸附柱移入新的無RNA酶的1.5 mL離心管中,在膜*加入25µL洗脫液,室溫靜置1min,12,000 rpm 離心45S,獲得總RNA。

三、RT-PCR

1. 反應(yīng)體系配制:每份總體積20µL,分別取16.8µL RT-PCR反應(yīng)液A(用前混勻)、1.2µL RT-PCR反應(yīng)液B(用前混勻)和2µL模板RNA,混勻。

2. 反應(yīng)程序:在PCR儀上運(yùn)行以下程序:42 45 min,94 3 min ;94 30 s 、53 30 s 、72 30 s,35個循環(huán);72 延伸10 min。

四、電泳

1. 取20mL 50倍TAE電泳緩沖液,用雙蒸水稀釋至1000mL。

2. 稱取1.5g瓊脂糖放于250mL的錐形瓶中,加入100mL稀釋好的TAE電泳緩沖液,微波爐加熱溶解,稍稍冷卻后加入10µL染色液混勻,倒入插有梳子的制膠板中。

3.待膠凝固后,取10µL PCR產(chǎn)物點(diǎn)樣于凝膠孔中,以5V/cm的電壓于稀釋好的TAE電泳緩沖液中的電泳,待溴酚蘭指示劑電泳至凝膠下部時(shí)結(jié)束電泳,在紫外燈下觀察結(jié)果。

【結(jié)果判斷】

     陽性對照出現(xiàn)332bp擴(kuò)增帶,陰性對照無帶出現(xiàn)(引物帶除外)時(shí),實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。被檢樣品出現(xiàn)332bp擴(kuò)增帶為禽流感病毒陽性,否則為陰性。

【公司名稱】 廣州健侖生物科技有限公司
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【電子郵件】 simon@jianlun.com
【騰訊 】
【公司】 www.jianlun.com 
【營銷中心】 廣州市中山大道中358號東溪大廈B座511室
【公司地址】 廣州市天河區(qū)車陂第十五工業(yè)園一幢4067室

關(guān)鍵詞:移液器 移液器吸頭

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