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小鼠成纖維細胞生長因子11ELISA試劑盒*

時間:2014/9/22閱讀:652
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小鼠成纖維細胞生長因子11(FGF11)ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當。

ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應總是需要一定時間的溫育。

溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結合的合適溫度。在建立小鼠成纖維細胞生長因子11(FGF11)ELISA試劑盒方法作反應動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)物的生成可達。為加速反應,可提高反應的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜,以形成zui多的沉淀。但因所需時間太長,在小鼠成纖維細胞生長因子11(FGF11)ELISA試劑盒中一般不予采用。

保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均采用水浴,可將ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底應貼著水面,使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反應板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA板應放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規(guī)定的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應如此。無論是水浴還是濕盒溫育,反應板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應,操作時的室溫應嚴格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),標準室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,ELISA板只要平置于操作臺上即可。應注意溫育的溫度和時間應按規(guī)定力求準確。為保證這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板同時測定。

小鼠成纖維細胞生長因子11(FGF11)ELISA試劑盒檢測方法簡單,靈敏度高,我個人覺得ELISA檢測血清或者培養(yǎng)上清的細胞因子、胰島素、激素等分泌型的小分子蛋白的定量檢測;病原體抗原的定性與定量;評估自己制備的血清抗體的效價等。好多客戶有個誤區(qū),拿來一個指標就想當然地嘗試用ELISA去檢測,我還是建議多動腦,該檢測活性的檢測活性,該做western的做western

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