小鼠免疫的程序

一、抗原的準備
1、收到抗原時，首先要了解抗原的種類、性質和濃度，以便采取不同的處理方法。
2、多肽抗原，一般分多肽—偶聯KLH和多肽—偶聯BSA（或GGG）或裸多肽三種。多肽—偶聯KLH一般用于免疫，而多肽—偶聯BSA或裸肽一般用于檢測，在免疫時注意區分使用。
3、分裝
（1）收到抗原后，應及時按免疫需要分裝，避免反復凍融。
（2）如抗原是大腸桿菌重組蛋白，可能存在不溶性沉淀，分裝前，應用超聲粉碎儀粉碎，要注意，在冰浴中進行，超聲強度應以溶液不產生泡沫的水平為準，超聲強度過大，易產生泡沫導致蛋白變性，超聲強度太低效果不佳，每次2-3秒，重復3-4次，超聲完畢立即分裝。
（3）分裝管應用不粘附蛋白的樣品管，要用二種不同顏色的標簽明確區分免疫用抗原和檢測用抗原，并寫明分裝日期，抗原名，濃度和劑量。
A 免疫用抗原：一般50ug/每只小鼠×5只=250ug/1個分裝管，備做免疫用。另分裝2個100ug/1管，備做融合前加強免疫用，再分裝25ug/只/×5=125ug/1個分裝管，共分裝4-5管，備加強免疫用。
B 檢測用抗原：100ug/每管，分裝共3管。
C 分裝好的抗原除馬上免疫用管外，其余均裝入小塑料袋中，寫好抗原名標簽，馬上存入-700C。剩余抗原交保管員存-700C，并填好交接班表格。

二、免疫程序
1、多肽類抗原（包括MAP型多肽），*次用福氏*佐劑，每只50-100ug ,腹腔注射，總劑量0.5ml/只，第二次起用福氏不*佐劑，劑量為25-50ug/0.5ml/只，間隔3周，第三次注射后10天測血（ELISA 法），如滴度未達到1:104, OD1.0以上，則繼續免疫，如ELISA已達滴度，則可取血清送WB或ICC檢測。
2、蛋白類抗原：所用抗原的劑量等與多肽類相同，但進程有差異，免疫21天后，第二次免疫后，每次間隔為10天。

三、抗原的乳化
抗原乳化前，應檢查抗原管有否顆粒狀沉淀，如有沉淀，應超聲粉碎后，立即溶解在0.01M PH7.2 PBS中（PBS應為無菌液），每只小鼠腹腔注射總量0.5ml，用2-5ml注射器，取1.25ml含抗原的PBS，另一支注射器取（等體積）福氏*佐劑或不*佐劑，用不銹鋼連接接頭連接，反復推拉混合約10-30分鐘，平放靜置30分鐘，如水乳相不再分離，即可注射小鼠。