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院遺傳所提高CRISPR/Cas9編輯擬南芥基因組效率

時間:2015/11/10閱讀:937
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CRISPR/Cas9系統作為目前zui廣泛使用的基因組編輯技術,不僅成功用于編輯人類、小鼠和斑馬魚等動物基因組,在過去兩年也成功修飾了擬南芥、水稻以及小麥等植物基因組。目前轉化擬南芥通常采用農桿菌介導的沾花法(floral dip),在此方法中胚囊是T-DNA的主要目標,而已有研究表明普遍采用的CaMV 35S 啟動子在生殖細胞中活性極低,用CaMV 35S 驅動的Cas9對擬南芥基因組的編輯效率明顯低于水稻,并且絕大多數T1植株只是體細胞突變,并不能遺傳到T2。
中國科學院遺傳與發育生物學研究所謝旗研究組通過YAO基因啟動子驅動Cas9,極大地提高CRISPR/Cas9編輯擬南芥基因組的效率。YAO(Li et al., 2010)是早前楊維才研究組發現的一個在細胞分裂旺盛組織優先表達的基因,尤其在胚、胚囊、胚乳以及花粉中有很高的表達量;謝旗研究組將35S:hSpCas9-BRI1-sgRNA和pYAO:hSpCas9-BRI1-sgRNA載體通過農桿菌介導的floral dip方法分別轉化擬南芥,通過比較發現,35S:hSpCas9對BRI1基因突變的效率只有4.3%,而pYAO:hSpCas9對BRI1基因突變的效率高達90.5%,而且對T1單株植物的編輯形式更多,通過檢測沒有Cas9的T2植株,還發現一些突變的BRI1等位基因是可遺傳的。為了確認pYAO:hSpCas9對擬南芥其他基因同樣有很高的編輯效率,PDS3 被選為靶基因,通過研究發現,pYAO:hSpCas9對PDS3 的編輯效率同樣高達88.5%。同時,構建的pYAO:hSpCas9載體可以連接多個靶點,同時對擬南芥基因組多個基因進行編輯。
該研究結果于10月22日在線發表于Molecular Plant 雜志。謝旗研究組博士后閆留華和博士研究生魏紹巍為該論文的共同*作者。該研究得到了國家自然科學基金委重大項目和轉基因專項的資助。閆留華得到了博士后基金的資助。

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