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僅供研究用
貨號(hào)：QYS-234088
山梨醇含量試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100 管/96 樣

山梨醇含量試劑盒說(shuō)明書(shū)正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

山梨醇廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是糖運(yùn)輸形式之一，而且與生物抗逆性和食物風(fēng)味密切相關(guān)。因此，在糖代謝、抗逆性和食品研究中經(jīng)常需要檢測(cè)山梨醇含量變化。
測(cè)定原理：

山梨醇在堿性溶液中與銅離子形成藍(lán)色絡(luò)合物，在 655nm 波長(zhǎng)有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 3.5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 3.5mL×1 瓶 ，4℃保存。
山梨醇的提取：

按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 蒸餾水），研磨成勻漿，95℃水浴 10 分鐘（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心 10min，取上清液待測(cè)。
山梨醇含量試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 655nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表（在 EP 管中依次加入下列試劑）：

試劑（μL）    空白管    測(cè)定管
試劑一    35    35
試劑二    35    35
樣本        230
蒸餾水    230    

混勻后室溫靜置 15min，8000g，25℃離心 10min，取 200μL 上清液至微量石英比色皿或 96 孔板中，測(cè) 655nm 下吸光值 A，計(jì)算 ΔA=A 測(cè)定管-A 空白管。空白管只要做一管。
山梨醇含量計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.352x - 0.002；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。2、按照樣品質(zhì)量計(jì)算山梨醇含量（mg /g 鮮重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷W 3、按照樣本蛋白濃度計(jì)算

山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷Cpr V1：加入樣本體積，0.23mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；

W：樣本質(zhì)量，g

山梨醇含量試劑盒說(shuō)明書(shū)b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.176x - 0.002；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。2、按照樣品質(zhì)量計(jì)算山梨醇含量（mg /g 鮮重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷W
3、按照樣本蛋白濃度計(jì)算

山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(V1×Cpr)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷Cpr V1：加入樣本體積，0.23mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；

W：樣本質(zhì)量，g

注意：zui低檢測(cè)限為 1μg/g 鮮重或 0.01μg /mg prot