人異常原(APT)酶聯(lián)免疫分析 
試劑盒使用說明書 
本試劑僅供研究使用        目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關
液體樣本中異常原(APT)的含量。 
實驗原理： 
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中 人異常原(APT)水平。用純化的人異常凝
血酶原(APT)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入異常原(APT)，
再與HRP 標記的異常原(APT)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*
洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui
終的黃色。顏色的深淺和樣品中的異常原(APT)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下
測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人異常原(APT)的含量。 
 
試劑盒組成： 
試劑盒組成  48孔配置  96 孔配置  保存 
說明書  1份  1份   
封板膜  2片（48）  2 片（96）   
密封袋  1個  1個   
酶標包被板  1×48  1×96  2-8℃保存 
標準品：90ng/ml  0.5ml×1 瓶  0.5ml×1瓶  2-8℃保存 
標準品稀釋液  1.5ml×1 瓶  1.5ml×1瓶  2-8℃保存 
酶標試劑  3 ml×1瓶  6 ml×1 瓶  2-8℃保存 
樣品稀釋液  3 ml×1瓶  6 ml×1 瓶  2-8℃保存 
顯色劑A 液  3 ml×1瓶  6 ml×1 瓶  2-8℃保存 
顯色劑B液  3 ml×1瓶  6 ml×1 瓶  2-8℃保存 
終止液  3ml×1瓶  6ml×1 瓶  2-8℃保存 
濃縮洗滌液  （20ml×20倍）×1瓶  （20ml×30 倍）×1瓶  2-8℃保存 
 
樣本處理及要求： 
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上
清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。 
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心
20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次
離心。 
3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程
中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000 轉/ 
  2 
分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞
濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20 分
鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。 
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br>用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器
將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待
檢測，其余冷凍備用。 
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融. 
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 
 
操作步驟： 
1.  標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔，在*、第二孔中分別加標
準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二
孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl棄掉，再各取 50μl分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl，
濃度分別為60 ng/ml，40 ng/ml，20 ng/ml，10 ng/ml，5 ng/ml）。 
2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣
品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混
勻。 
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。 
4.  配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的 20倍）倍稀釋后備用。  
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復5次，拍干。 
6.  加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
7.  溫育：操作同3。 
8.  洗滌：操作同5。 
9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.   
10.  終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。 
11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進行。 
 
注意事項： 
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。 
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 
3． 各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，使用排槍加樣。  
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4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。 
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 
6． 底物請避光保存。 
7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. 
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 
9． 本試劑不同批號組分不得混用。 
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 
 
計算： 
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，         
在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD             
值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋             
倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD值計算出標             
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值             
代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋             
倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。                                     
    
                                                                                             
 
（此圖僅供參考） 
 
 
 
試劑盒性能： 
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上。 
2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和11% 
 
 
檢測范圍：                                                
2 ng/ml -80 ng/ml                                           
                                                         
保存條件及有效期： 
1.試劑盒保存： ；2-8℃。 
2．有效期：6個月