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272次促黃體生成激素放免試劑盒操作步驟【成份】
[藥盒組成及配制] 50管 100管 200管
1.碘[125I]-LH(紅) 1瓶 1瓶 2瓶
2.LH校準品 1套 1套 1套
LH校準品(7瓶/套)濃度分別為:(0、5、10、25、50、100、200)mIU/mL。
3.LH抗體(蘭) 1瓶 1瓶 2瓶
4.質量控制樣品 1套 1套 1套
5.分離試劑 1瓶 1瓶 2瓶
6.藥盒使用說明書 1張 1張 1張
促黃體生成激素放免試劑盒操作步驟[操作方法]
1.樣品采集:取全血,分離血清,備用。(2~8)℃放置可保存2周;若冰凍保存,可放置五周。脂血或溶血樣品影響測定結果。
2.實驗方法:試管編號,按下表程序操作。
操作表 單位:μL
管別 | 校準品 | 樣品 | 蒸餾水 | 抗體 | 125I-LH | 混勻,室溫放置(12~16)小時。 | 分離劑 |
總T管 | -- | -- | -- | -- | 100 | -- | |
NSB管 | 200(S0) | -- | 100 | -- | 100 | 500 | |
S0管 | 100 | -- | -- | 100 | 100 | 500 | |
S1管~S末管 | 100 | -- | -- | 100 | 100 | 500 | |
血樣品管 | -- | 100 | -- | 100 | 100 | 500 |
混勻,室溫放置15分鐘,離心(3500轉/分)15分鐘,吸棄上清液,在放免儀上測定各管沉淀的放射性計數(cpm)。
[數據處理]
1.計算機處理:建議采用“對數計量-相對結合率的分數對數”〔log(dose)~logit(Bi/B0)〕數學模型或四參數數學模型擬合。
2.計算、繪圖法:
計算各管的百分結合率:以S0(cpm數)為B0,各校準管Si(cpm數)為Bi,求各管的百分結合率。
⑴.線性回歸:用logX~logitY回歸,求出r、a、b值,樣品含量可由下式計算得出。
⑵.繪圖法:用各校準點計算的結果,在log~logit坐標紙上繪制校準曲線圖,被測樣品的含量可根據Bi/B0的百分結合率從校準曲線圖上查出。
[正常參考值]
各實驗室應根據實驗模型建立自己的動物參考值。
[技術特性]
1.靈敏度:<0.3mIU/mL
2.測定范圍:(5~200)mIU/mL
3.精密性:批內變異系數CVw<10%,批間變異系數CVb<15%。
[參考文獻]
1.Bremnerw J:PituifaryPonadotropinsans their dosorders,Principles of endocinodosy and metabolism KL 1990,pp152-6.
2.Wu CH:Monitoring of oradation induction Fertilsteril 30:617,1978.
【性狀】
液體組份應澄清,無沉淀或絮狀物。
【放射性核素半衰期】
放射性核素碘[125I]半衰期(T1/2)=60天
促黃體生成激素放免試劑盒操作步驟【適應癥】
[測定原理]
本藥盒是利用放射免疫分析方法進行測定的。在均相競爭抑制反應中采用平衡法,對血清樣品中LH的含量進行直接測定。測定中校準品、樣品等中的LH與125I-LH競爭*的LH抗體結合位。當被測樣品中LH的含量高時,剩余的抗體結合位就少,從而與抗體結合的125I-LH就少,反之亦然。利用分離試劑分離出抗原-抗體復合物,并測定復合物中的放射性計數。125I-LH的結合量與樣品中LH的含量呈函數關系,通過數據處理可求出樣品中LH的含量。
[臨床意義]
促黃體生長激素(LH)是由垂體前葉分泌的糖蛋白激素,其分子量大約為30000,由兩條多肽鏈(即α和β亞單位)組成。LH的α亞單位與FSH、LH和HCG的亞單位的結構相似。β亞單位在上述激素之間是不同的,從而賦予各激素各自的生物及免疫學特性。在雌性體中,LH在卵泡期限與FSH一起促進卵泡的成熟、雌性激素的合成和分泌;促進排卵和使排卵后的卵泡轉變為黃體;促進間質的生長;并促進黃體合成和孕激素與雌性激素的分泌。雄性LH促進睪丸間質細胞增生,促進其合成和分泌睪丸酮。由于LH和FSH的作用是互相協同的故二者常同時測定。LH增高見于Klinefelter綜合癥、Turner綜合癥、性腺切除后及促性腺激素產生腫瘤;減低見于西蒙氏病、席漢氏綜合癥、肥胖性生殖器退化綜合癥、垂體性侏儒、睪丸腫瘤、卵巢腫瘤、神經性厭食及使用雌激素后。
【注意事項】
1.所有試劑包括待測樣品實驗前應事先在室溫下平衡20分鐘,且使用前應充分搖勻。
2.不同批試劑不能混合使用,每份樣品都應做雙管實驗。
3.本實驗使用放射性核素碘[125I](劑量為0.2μCi/mL),故應注意放射防護。放射性廢物須按放射防護條例規定處理。
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