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技術文章
新的可視化技術被發現 電鏡將遭淘汰
點擊次數：171 發布時間：2016-3-11
真核生物核的分子結構很大程度上仍未被開發。在2月25日的Science上發表的研究運用的冷凍電子斷層成像技術(Cryo-ET)對HeLa細胞核周圍進行了三維快照。Cryo-ET提供的三位細胞圖像現在有越來越高的分辨率，已經達到了亞納米級的具有細胞形態的分辨率。
原位成像技術是很具有挑戰性的，因為有很多限制，但是現在可以克服了：(i)低溫聚焦例子束可以洞察冷凍的細胞和組織，這些樣本直接通過透射電子顯微鏡TEM觀察會太厚。(ii)直接觀測提高了冷凍透射電鏡的圖像質量。(iii)zui近開發的電壓相位板(VPP)提高了特別是低空間頻率的相，且沒有散焦需要對比，讓獲得的圖像能直接顯示結構狀況。
Hela細胞通過綠色熒光蛋白標記β-微管蛋白，mCherry標記組蛋白2B。冷凍電子斷層成像技術對核附近的三維圖像分析顯示可以對在核內和核膜的大分子復合物直接可視化。
為了提供更好的量化的檢測，該研究對80S的核糖體進行了檢測，單個核糖體產生平均分辨率為28Å的圖像，而后根據他們在內質網的空間排列，內質網結合的核糖體(每143粒)產生了分辨率為35Å的圖像。亞X線斷層對核糖體的平均和分類體現了這種細胞質翻譯機器的自然結構和組織。
大分子復合物通常不能嚴格地確定，因為它的結構是根據功能改變的。該研究對核孔復合物的大型動態結構分析顯示顯示了這項新技術可以檢出單個復合物的差異。
Cryo-ET可用于對以前難以琢磨的結構比如核小體的鏈，核層狀結構的絲進行原位可視化。