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人促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)ELISA Kit說明書

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更新時間:2018-04-29 05:12:26瀏覽次數(shù):174次

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人促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)ELISA Kit說明書

Elisa實驗常用方法: 
雙抗體夾心法測定抗原 

將抗原免疫*種動物獲得的抗體吸附于固相表面;

加抗原,形成抗原-抗體復合物; 

加抗原免疫第二種動物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復合物;

加酶標抗抗體(第二種動物抗體的抗體); 

加底物。底物的降解量=抗原量。

人促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)ELISA Kit說明書

用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。 
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。 
3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。 
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。 
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。 
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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