人雌二醇(E2)ELISA試劑盒
顯色
◎HRP催化底物的一步呈色反應(yīng),同樣需要一定的時間和溫度,
◎ 一定要按照說明書規(guī)定的時間溫度(一般為37°C,10-15分鐘)恒定反應(yīng)后終止
◎或根據(jù)臨界值質(zhì)控血清吸光度值達(dá)0.2左右使的時間而恒定反應(yīng)時間.
酶標(biāo)儀判讀結(jié)果
◎顯色反應(yīng)終止后應(yīng)立刻比色(30分鐘內(nèi))。
常見的顯色系統(tǒng)有OPD和TMB二種,以后者zui為常見,而TMB酸不易終止因此必須盡快比色以免影響結(jié)果。OPD終止后顯棕色,測定波長為490nm;
TMB終止后顯黃色,測定波長為450nm,
二種底物的校正波長均用630nm。
使用雙波長的優(yōu)點(diǎn)可以消除反應(yīng)板條上的劃痕手印的干擾。同時要注意反應(yīng)板應(yīng)用紙吸干后才能置酶標(biāo)儀中比色,否則吸光度易出現(xiàn)負(fù)值或損壞濾光片。
報(bào)告方式
◎定性試驗(yàn) 國內(nèi)外為便于統(tǒng)一計(jì)算,一律按S/C.O方式報(bào)告,S為標(biāo)本A值,C.O即Cut Off值(陽性判定值)
◎夾心法和間接法以S/C.O≥1為陽性;
竟?fàn)幏ㄅc中和法以S/C.O﹤1為陽性
◎Cut Off的計(jì)算公式以試劑盒說明書的為準(zhǔn)常見的有:
◎A) C.O=2.1×N(當(dāng)N不足0.05時按0.05計(jì)),
◎此公式由P/N>2.1換算而來,常用于夾心法。
◎B) C.O=0.5×N,從抑止率公式換算而來,
◎常用于竟?fàn)帲泻头?br />◎C) C.O=N+C(C為常數(shù)),用于間接法。
◎D) C.O=C×P+N(C為常數(shù)),用于間接法。此公式zui客觀,但對生產(chǎn)廠家要求很高,陰陽性對照測定值要基本恒定。
人雌二醇(E2)ELISA試劑盒人
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