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人血紅蛋白C(HbC)ELISA試劑盒

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更新時間:2014-12-11 15:31:52瀏覽次數(shù):106次

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人血紅蛋白C(HbC)ELISA試劑盒

人白介素3(IL-3)ELISA試劑盒操作步驟

    1. 包被抗原:用包被液將抗原作適當(dāng)稀釋, 一般為1~10微克/孔,每孔加200微升,37℃溫育1小時后,4℃冰箱放置16~18小時。

    2. 洗滌:倒盡板孔中液體,加滿洗滌液,靜放三分鐘,反復(fù)三次,zui后將反應(yīng)板倒置在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡。

   3. 加封閉液200微升,37℃放置一小時。

   4. 洗滌同2。

   5. 加被檢血清:用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,,每孔200微升。同時作稀釋液對照。37℃放置2小時。

   6. 洗滌同2。

   7. 加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時。

   8. 洗滌同2。

   9. 加底物:鄰苯二胺溶液加200ml,室溫暗處10--15分鐘。

   10. 加終止液:每孔50微升。

   11. 觀察結(jié)果:用酶聯(lián)免疫檢測儀記錄490nm讀數(shù)。

人血紅蛋白C(HbC)ELISA試劑盒

b.標(biāo)本/陰性對照比值

在實驗條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的A值后,計算S/N值。也有寫作P/N的,這里的P不代表陽性(positive),而是病人(patient)的縮寫,不應(yīng)誤解。為避免混淆,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中,有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)多為各種測定所沿用。實際上每一測定系統(tǒng)應(yīng)該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)注意的是,N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此,這類試劑盒規(guī),如N<0.05(或其他數(shù)值),則按0.05計算,否則將出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

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