人血紅蛋白C(HbC)ELISA試劑盒
人白介素3(IL-3)ELISA試劑盒操作步驟
1. 包被抗原:用包被液將抗原作適當稀釋, 一般為1~10微克/孔,每孔加200微升,37℃溫育1小時后,4℃冰箱放置16~18小時。
2. 洗滌:倒盡板孔中液體,加滿洗滌液,靜放三分鐘,反復三次,zui后將反應板倒置在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡。
3. 加封閉液200微升,37℃放置一小時。
4. 洗滌同2。
5. 加被檢血清:用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,,每孔200微升。同時作稀釋液對照。37℃放置2小時。
6. 洗滌同2。
7. 加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時。
8. 洗滌同2。
9. 加底物:鄰苯二胺溶液加200ml,室溫暗處10--15分鐘。
10. 加終止液:每孔50微升。
11. 觀察結果:用酶聯免疫檢測儀記錄490nm讀數。
人血紅蛋白C(HbC)ELISA試劑盒
b.標本/陰性對照比值
在實驗條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,這種判斷法較為合適。在得出標本(S)和陰性對照(N)的A值后,計算S/N值。也有寫作P/N的,這里的P不代表陽性(positive),而是病人(patient)的縮寫,不應誤解。為避免混淆,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中,有些作者定出S/N為陽性標準,現多為各種測定所沿用。實際上每一測定系統應該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應注意的是,N所代表的陰性對照是不含受檢物質的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質或蛋白質含量較底的緩沖液,以致反應后產生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此,這類試劑盒規,如N<0.05(或其他數值),則按0.05計算,否則將出現假陽性結果。
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