人IPO-38蛋白(IPO38)ELISA試劑盒
人IPO-38蛋白(IPO38)ELISA試劑盒操作步驟
1. 包被抗原：用包被液將抗原作適當稀釋, 一般為1～10微克/孔，每孔加200微升，37℃溫育1小時后，4℃冰箱放置16～18小時。
2. 洗滌：倒盡板孔中液體，加滿洗滌液，靜放三分鐘，反復三次，zui后將反應板倒置在吸水紙上，使孔中洗滌液流盡。
3. 加封閉液200微升，37℃放置一小時。
4. 洗滌同2。
5. 加被檢血清：用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,，每孔200微升。同時作稀釋液對照。37℃放置2小時。
6. 洗滌同2。
7. 加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時。
8. 洗滌同2。
9. 加底物：鄰苯二胺溶液加200ml，室溫暗處10--15分鐘。
10. 加終止液：每孔50微升。
11. 觀察結果：用酶聯免疫檢測儀記錄490nm讀數。
人IPO-38蛋白(IPO38)ELISA試劑盒
結合物制得后，在用作ELISA試劑前尚需確定其適當的工作濃度。使用過濃的結合物，既不經濟，又可使本底增高；結合物的濃度過低，則又影響檢測的敏感性。所以必須對結合物的濃度予以選擇。zui適的工作濃度就是指結合物稀釋至這一濃度時，能維護一個低的本底，并獲得測定的*靈敏度，達到zui合適的測定條件和測定費用的節省。就酶標抗體本身而言，它的有效工作濃度是指與其相應抗原包被的載體作試驗時，能得到陽性反應的zui高稀釋度。例如某一HRP：抗人IgG制劑標明的工作濃度為1:5000，表示該制劑經1:5000稀釋后，在與人IgG包被的固相作ELISA試驗時，將發生陽性反應。但在用于具體的ELISA檢測中，酶標抗體的zui適工作濃度受到固相載體的性質、包被抗原或抗體的純度以及整個檢測系統如標本、反應溫度和時間等的影響，因此必須在實際測定條件下進行"滴配"選擇能達到高敏感度的zui大稀釋度作為試劑盒中的工作濃度。
人IPO-38蛋白(IPO38)ELISA試劑盒
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