人混合系列蛋白激酶樣結構域(MLKL)ELISA試劑盒
人混合系列蛋白激酶樣結構域(MLKL)ELISA試劑盒操作步驟
1. 包被抗原:用包被液將抗原作適當稀釋, 一般為1~10微克/孔,每孔加200微升,37℃溫育1小時后,4℃冰箱放置16~18小時。
2. 洗滌:倒盡板孔中液體,加滿洗滌液,靜放三分鐘,反復三次,zui后將反應板倒置在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡。
3. 加封閉液200微升,37℃放置一小時。
4. 洗滌同2。
5. 加被檢血清:用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,,每孔200微升。同時作稀釋液對照。37℃放置2小時。
6. 洗滌同2。
7. 加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時。
8. 洗滌同2。
9. 加底物:鄰苯二胺溶液加200ml,室溫暗處10--15分鐘。
10. 加終止液:每孔50微升。
11. 觀察結果:用酶聯免疫檢測儀記錄490nm讀數。
人混合系列蛋白激酶樣結構域(MLKL)ELISA試劑盒
另一種HRP的底物為3-(4-羥基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,HPPA],經HRP作用后,產物顯熒光,可用熒光光度計測量。用于ELISA的優點為可加寬定量測定的線性范圍。
HRP對氫受體的專一性很高,僅作用于H2O2、小分醇的過氧化物和尿素過氧化物(urea peroxide)。H2O2應用zui多,但尿素過氧化物為固體,作為試劑較H2O2方便、穩定。試劑盒供應尿素過氧化物片劑,用蒸餾水溶解后,在底物緩沖液中密閉、低溫(2~8℃)可穩定1年。
人混合系列蛋白激酶樣結構域(MLKL)ELISA試劑盒
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