人血小板衍化生長因子-BB(PDGF-BB)
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
人血小板衍化生長因子-BB(PDGF-BB)
質量控制(Quality Control,QC)
定性試驗:ELISA定性試驗的臨床意義在于是否檢出病原體,與檢出量無關,因此QC要保證試驗的靈敏度和特異性。生化的質控圖方法僅能觀察靈敏度而無法監控特異性。
建議使用臨界值血清界定法:將試劑盒所設的陰陽性對照作為內對照指示反應;另設臨界值、高值質控血清,正常人血清作為外對照,與標本同時檢測,臨界值S/C.O≥1,高值質控血清S/C.O≥10,正常人血清A值在0.05~0.07之間。
◎陽性質控血清失控(臨界值為靈敏度,高值為"HOOK"效應監控)應重做陰性標本;陰性對照失控應重做陽性標本。
◎以表格式記錄每塊板的外對照實驗結果,作為QC資料存檔。
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