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人前列腺素D合成酶(PTGDS)ELISA試劑盒

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更新時間:2018-01-22 23:56:33瀏覽次數:201次

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在處理和保存方面要考慮以下幾個方面:

 

  (1)要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色。

 

  (2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。

 

(3)血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應在-70℃以下。

 

  (4)冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用,從而引起假陰性結果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。

 

(5)標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應離心沉淀后取上清檢測。

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間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體(抗*抗體)以檢測與固相抗原結合的受檢抗體,故稱為間接法(見圖2-3)。操作步驟如下:

1)將特異性抗原與固相載體聯結,形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。

2)加稀釋的受檢血清,保溫反應。血清中的特異抗體與固相抗原結合,形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。

3)加酶標抗抗體。可用酶標抗人Ig以檢測總抗體,但一般多用酶標抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗體抗體結合,從而間接地標記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量與標本中受檢抗體的量正相關。

4)加底物顯色

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