ELISA試劑盒測定現(xiàn)一般為采用手工操作的以微孔板條為固相的測定形式，測定操作十分簡略，一般涉及到標(biāo)本的搜集保留、試劑預(yù)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、成果判別和成果陳述及解釋等方面，其間任一過程的不妥都會影響測定成果，且尤以加樣、溫育和洗板等過程為甚?，F(xiàn)分述如下。    
一、標(biāo)本的搜集和保留    
用于ELISA測定的標(biāo)本zui為常用的是血清（漿），有時由于特定的檢查意圖，也用到唾液、腦脊液、尿液、大便等標(biāo)本。如今上運用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和醫(yī)治藥物等。對用于激素和醫(yī)治藥物測定的血清標(biāo)本的搜集，要留意搜集時刻甚或體位有也許會對測定成果發(fā)生影響。如可的松在早晨4～6點之間，會有一峰值呈現(xiàn)：生長激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性辦法開釋，因而，在測定此類激素時，有必要在親近相連的時刻間隔內(nèi)采納數(shù)份血樣本，以其間間值為測定值。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r，血清中腎素活性將呈現(xiàn)明顯增高。再如醫(yī)治藥物的檢查，應(yīng)根據(jù)藥代動力學(xué)挑選服藥后的zui適時刻抽血檢查。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢查的血清標(biāo)本的搜集則沒有時刻和體位方面的影響。 
ELISA試劑盒要思考以下幾個方面：    
（1）要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有相似過氧化物的活性，因而，在以HRP為符號酶的人ELISA試劑盒測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相，然后與后邊參加的HRP底物反響顯色。    
（2）樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長，其所排泄的一些酶也許會對抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶自身會對用相應(yīng)酶作符號的測定辦法發(fā)生非特異性干擾。    
（3）血清標(biāo)本如是以無菌操作別離，則可以在2～8℃下保留一星期，如為有菌操作，則主張冰凍保留。樣本的長時刻保留，應(yīng)在-70℃以下。    
（4）冰凍保留的血清標(biāo)本須留意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生破壞效果，然后引起假陰性成果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，重復(fù)倒置混勻即可。     
（5）標(biāo)本在保留中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所造成的的混濁或絮狀物時，應(yīng)離心沉積后取上清檢查。  
二、試劑預(yù)備     
在試驗室，對試劑預(yù)備一般不太留意，一般的做法是，在試驗時將試劑從冰箱中拿出來即用，而疏忽了這種做法有也許影響后邊溫育時刻不行的疑問，其直接的結(jié)果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢查呈現(xiàn)假陰性。因而在ELISA測定中試劑的預(yù)備zui為要害的是，在試驗開端前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測定，以使試劑盒在運用前與室溫平衡。這樣做的意圖，首要是為了在后邊的溫育反響過程中，能使反響微孔內(nèi)的溫度能較快地到達(dá)所請求的高度，以滿意測定請求。其次，如今的產(chǎn)品ELISA試劑盒中的洗板液均需在試驗室運用時對所供給的濃縮液稀釋制造，因而稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。此外，當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時，則底物溶液應(yīng)在反響顯色前暫時制造。    
三、ELISA試劑盒加血清樣本及反響試劑    
在如今的人ELISA試劑盒產(chǎn)品試劑盒中，血清樣本的參加幾乎是僅有的要運用微量加樣器參加樣本的過程，運用微量加樣器加樣有必要留意的要害點。?