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上海紀寧實業有限公司

ELISA試劑盒的使用和操作過程

時間:2018-3-13閱讀:929
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我們知道ELISA試劑盒是免疫診斷中的一項新技術,現已成功地使用于多種病原微生物所引起的流行癥、寄生蟲病及非流行癥等方面的免疫診斷。也已使用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據現已使用的成果,認為ELISA法具有活絡、特異、簡單、快速、安穩及易于自動化操作等特色。
 
ELISA試劑盒的使用:
1、免疫酶染色各種細胞內成份的定位。
2、研討抗酶抗體的組成。
3、閃現微量的免疫沉淀反響。
4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。
 
ELISA試劑盒的操作過程:
一、間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;
2.次日洗刷3次;
3.加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃孵育1小時,洗刷;
4.(一起做空白、陰性及陽性孔對照)于反響孔中,參加新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘,洗刷;
6.’zui終一遍用DDW洗刷。
其他過程同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
二、雙抗體夾心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗刷緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗刷,下同)。
2. 加樣:加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗刷。(一起做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反響孔中,參加新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗刷。
4. 加底物液顯色:于各反響孔中參加暫時制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反響:于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml。
6. ELISA試劑盒成果斷定:可于白色布景上,直接用肉眼調查成果:反響孔內色彩越深,陽性程度越強,陰性反響為無色或極淺,根據所呈色彩的深淺,以“+"、“-"號表明。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規則的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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