設計ELISA復孔查看時，是對同一個樣品作兩次稀釋，再分別加到板上的兩個孔，仍是只稀釋一次，然后汲取兩次分別加到兩個孔？前者好像把稀釋時的過失也考慮到了，但做出來的效果兩個孔相關挺大的。而較常使用的是哪種稀釋方法？

為了減小過失，是先稀釋再加樣。而針對這位客戶所遇到的疑問，我公司技術人員是這樣說明的：

1. 前者測的是稀釋和移液的過失，后者只需移液過失。

2. 一般都是稀釋一次，分兩孔吧。同濃度的分復孔。
 
3. 由于是從同一原液稀釋，一般不考慮稀釋過失(稀釋過失是存在的)，都是稀釋到想要的倍數直接分孔(而不是逐個稀釋，這樣可以使稀釋過失減小)。

4. 復孔是為了掃除移液體積，板的影響，以及其他系統過失的，要求復孔的濃度是一起的。稀釋后分孔能滿意此要求，逐個稀釋不能。
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ELISA試劑盒操作技巧
    
1.操作前應對試驗的物理參數有充分的了解，如環境溫度（保持在18 C～25℃）、反應孵育溫度和孵育時間、洗刷的次數等，要先查看水育箱溫度，ELISA試劑盒是否符合要求。
    
2.正確使用加樣器加樣器應筆直參加標本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反應孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次第要與說明書一起，否則可導致效果過錯，試驗重復性差。
    
3.手工洗板加洗液時沖擊力不要太大，洗刷次數不要逾越說明書舉薦的洗刷次數，洗液在反應孑L內停留的時間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流，形成孔問污染，導致假陰性或假陽性。
    
4.要保證加液量一起 我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量禁絕，形成顯色不一致，判別過錯。
    
5.顯色液量不可過多 加樣的工作環境不能處于陽光直射的環境下，加顯色系統后要避光反應，顯色液量不能過多，避免顯色過強。