1， 什么時候需要穩(wěn)定細胞株？

以下實驗，構(gòu)建穩(wěn)定細胞株而不是瞬時轉(zhuǎn)染geng能滿足實驗要求：

1)，外源片段在分裂細胞中經(jīng)久(>2周)穩(wěn)定表達。雖然普通轉(zhuǎn)染實驗一般只能保證2-4天的轉(zhuǎn)染和表達效率，但腺病毒載體在多數(shù)分裂細胞中可以維持2-4周內(nèi)的高轉(zhuǎn)染效率和表達周期。而非分裂細胞，可以使用腺相關(guān)病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)外源基因，因為腺相關(guān)病毒載體在許多非分裂細胞中可以保持長達1年的高效表達。

2)，需要構(gòu)建使用誘導(dǎo)表達系統(tǒng)，這主要是由于：a)，過表達基因或者干擾目的基因引起細胞毒性或者抑制細胞生長等不利因素; b)，目的基因的過表達或者干擾需要時空特異性。

3)，希望控制目的基因過表達或者干擾的拷貝數(shù)，以避免引入人為因素影響實驗結(jié)果的精-確性。構(gòu)建穩(wěn)定株可以幫助篩選拷貝數(shù)適量的細胞進行實驗研究。

4)，部分細胞種類，病毒載體亦無法達到高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，通過構(gòu)建穩(wěn)定株，達到外源片段的高效表達。

5)，經(jīng)久在少數(shù)幾類細胞中研究幾個基因的功能，通過構(gòu)建穩(wěn)定株，可以大大降低頻繁轉(zhuǎn)染或者病毒包裝的成本，也極-大方便實驗研究。

6)，部分蛋白穩(wěn)定性*，瞬時RNA干擾因為作用周期短，只能抑制目的基因的表達，但無法去除已經(jīng)表達的目的蛋白，所以需要通過構(gòu)建穩(wěn)定株實現(xiàn)geng好的基因干擾效果。

7)，需要往動物體內(nèi)注射表達有外源片段的細胞。需要構(gòu)建穩(wěn)定細胞株，以防止注射入動物體內(nèi)后，很快外源片段表達丟失。

8)，細胞個體差異(同一類細胞，不同個體細胞基因組存在差異)對實驗結(jié)果有干擾，需要構(gòu)建單克隆細胞株去除干擾。

9)，需要將外源片段插入基因組中，比如基因敲除，基因插入突變篩選等修飾基因組的實驗。

2， 什么時候不需要構(gòu)建穩(wěn)定細胞株？

以下實驗不需要構(gòu)建穩(wěn)定株：

1)，希望迅速觀察目的基因過表達或者干擾效果。例如在正式實驗之前進行的小規(guī)模預(yù)實驗。

2)，2-4天的瞬時表達已經(jīng)可以達到具體的實驗?zāi)康模热鐧z測兩個外源轉(zhuǎn)染的目的蛋白之間的相互作用，或者觀察某些細胞周期抑制，凋亡或細胞存活相關(guān)基因的細胞表型。

3)，細胞個體差異對實驗結(jié)果有影響。體外培養(yǎng)非原代細胞，多為轉(zhuǎn)化細胞系或者癌細胞，細胞個體差異大，瞬時轉(zhuǎn)染或者使用腺病毒/腺相關(guān)病毒載體進行轉(zhuǎn)導(dǎo)geng可以反映細胞群體行為。或者使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體構(gòu)建混合穩(wěn)定株。