在ELISA試劑盒中雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原zui常用的辦法,操作過(guò)程如下：
1.將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，構(gòu)成固相抗體。洗刷除掉未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2.加受檢標(biāo)本，保溫反響。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，構(gòu)成固相抗原抗體復(fù)合物。洗刷除掉其他未結(jié)合物質(zhì)。
3.加海標(biāo)抗體，保溫反響。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗刷未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此刻固相載體上帶有的酶量與紜本中受檢抗原的量相關(guān)。
4.加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色物。經(jīng)過(guò)比色，測(cè)知標(biāo)本由抗原的量。
在臨床查驗(yàn)中，此法適用于檢測(cè)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HbsAg、HbaAg、AFP、HCG等。只需取得針對(duì)受檢抗原的特異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而樹(shù)立此法。如抗體的來(lái)歷為抗血清，包被和海標(biāo)用
ELISA試劑盒的抗體別離取自不同種屬的動(dòng)物。如使用單克隆抗體，一般挑選兩個(gè)針對(duì)抗原上不同決定簇的單抗，別離用于包被固相和制備酶結(jié)合物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很髙的特異性，并且能夠?qū)⑹軝z標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一同保溫反響。