糖原合成酶GCS測試盒_糖原系列_分光光度法
測定方法：分光光度法
產品規格：50管/48樣
注 意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
GCS（EC 2.4.1.11）催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP，以α-1，4-糖苷鍵相連延長糖鏈，是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶，是胰島素作用的主要靶酶，對糖代謝的調節和血糖穩態的維持具有重要作用。
測定原理：
GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UDP，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下測定NADH下降速率，即可反映GCS活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體45 mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體41μL×1支，4℃保存；
試劑四：粉劑×1支， -20℃保存；
試劑五：粉劑×1瓶， -20℃保存；
糖原合成酶GCS測試盒_糖原系列_分光光度法
樣本的前處理：
按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。
2、工作液的配制：臨用前將試劑三和試劑四轉移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、試劑五的配制：臨用前在試劑五瓶中加入2.5mL試劑二充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
4、將工作液和試劑五置于37℃預熱5分鐘。
5、在1mL石英比色皿中加入50μL樣本、50μL試劑五和900μL工作液，立即混勻，記錄340nm處初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
注意：在該試劑盒中，若ΔA大于0.1，需將樣本用提取液稀釋適當倍數后測定，使ΔA小于0.1可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
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