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ELSIA試劑盒實驗的條件不同而異

閱讀:177發(fā)布時間:2017-2-6

這類反響的定性成果能夠用肉眼判別。目視標本也無色或近于無色者判為陰性,顯色明晰者為陽性。但在ELSIA試劑盒中,正常人血清反響后常可呈現(xiàn)呈色的本底,此本底的深淺因試劑的構(gòu)成和,因而試驗中有必要加測陰性對照。陰性對照的構(gòu)成應為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6)。在用肉眼判別成果時,更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的目標。
    目視法簡捷明晰,但頗具主觀性。在條件許可下,應該用比色計測定吸光值,這么能夠得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標本(sample,S)、陽性對照(P)、和陰性對照(N)的吸光值,然后進行核算。核算方法有多種,大致可分為陽性斷定值法和標本與陰性對照比值法兩類。
a. 陽性斷定值
陽性斷定值(cut-off value)一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù),以此作為判別成果陽性或陰性的規(guī)范。
    用此法判別成果請求試驗條件非常穩(wěn)定,ELSIA試劑盒的制備有必要規(guī)范化,陽性和陰性的對照品應契合必定的規(guī)范,須配用精細的儀器,并嚴厲按規(guī)則操作。陽性斷定值公式中的常數(shù)是在這特定的體系中經(jīng)過對大量標本的試驗檢查而得到的。現(xiàn)舉某種檢查HAg的試劑盒為例。人ELSIA試劑盒中的陰性對照品為不含HAg的復鈣人血漿,陽性對照品HAg的含量標明為P=9lusm2ng/ml。每次試驗設2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,人ELSIA試劑盒先核算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX),兩個平均數(shù)的差(P-N)有必要大于一個特定的數(shù)值(例0.400),試驗才有用。3個陰性對照A值均應≥0.5&timeCX,并≤1.5&timeCX,如其中之一超出此規(guī)模,則棄去,而已另兩個陰性對照從頭核算NCX;如有兩個陰性對照A值超出以上規(guī)模,則該次試驗無效。陽性斷定值按下式核算:
陽性斷定值=NCX+0.05
標本A值>陽性斷定值的為陽性,小于陽性斷定值的為陰性。應留意的是,式中0.05為該試劑盒的常數(shù),只適合于該特定條件下,而不是對各種試劑均可通用。
依據(jù)以上敘說能夠看出,在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質(zhì)控效果,試劑蛻變和操作不當均會發(fā)生"試驗無效"的成果。
b.標本/陰性對照比值
 ELSIA試劑盒在試驗條件(包含試劑)較難確保穩(wěn)定的情況下,這種判別法較為適宜。在得出標本(S)和陰性對照(N)的A值后,核算S/N值。也有寫作P/N的,這兒的P不代表陽性(positive),而是病人(patient)的縮寫,不該誤解。為防止混雜,更宜用S/N表明。在早期的間接法ELISA中,有些作者定出S/N為陽性規(guī)范,現(xiàn)多為各種測定所沿襲。實際上每一測定體系應該用試驗求出各自的S/N的閾值。更應留意的是,N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的ELSIA試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,致使反響后發(fā)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因而,這類試劑盒規(guī),如lt;0.05(或別的數(shù)值),則按0.05核算,不然將呈現(xiàn)假陽性成果。


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