革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法是：

1）涂片固定。

2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。

3）自來(lái)水沖洗。

4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。

5）水洗，用吸水紙吸去水分。

6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，20秒后水洗，吸去水分。

7）蕃紅染色液（稀）染1分鐘后，自來(lái)水沖洗。干燥，鏡檢。

革蘭氏染色法鑒定原理：該染色法所以能將細(xì)菌分為G+菌和G-菌，是由這兩類菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和成分的不同所決定的。G-菌的細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時(shí)溶解了類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)蕃紅復(fù)染后就成紅色。G+菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細(xì)菌仍保留初染時(shí)的顏色，呈現(xiàn)藍(lán)紫色

其重要的臨床意義在于：1.鑒別細(xì)菌 2.選擇藥物 3.與致病性有關(guān)：革蘭氏陽(yáng)性菌能產(chǎn)生外毒素，革蘭氏陰性菌能產(chǎn)生內(nèi)毒素；而內(nèi)毒素主要是指革蘭氏陰性菌胞壁成分中的脂多糖，兩者的致病作用不同。