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人胎盤堿性磷酸酶(PLAP)elisa試劑盒測定技術(shù)的發(fā)展:
臨床測定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學的發(fā)展,而方法學的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進步更新和型標記物的應用。目前,分子生物學正在并zui終肯定會讓我們對整個生命科學有一個全面而*的認識,其對免疫測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的,它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定變得輕而易舉,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。
人胎盤堿性磷酸酶(PLAP)elisa試劑盒操作中應注意以下5個方面:
1.隨著其他因素影響,某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)生大幅波動,因此有必要對標本進行預處理,例如對血清標本作適當稀釋,或離心分離血脂等。間接法測定中,標本適當稀釋還可降低非特異性反應。
2.加樣一般使用加液器,在ELISA中一般有4次加樣:加標本、加酶結(jié)合物、加底物和加終止液。加標本時必須每份標本使用一支移液器吸嘴,以免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和終止液時則不需更換吸嘴。
3.在成批手工檢測中,還應注意操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異,使抗原抗體反應和酶促反應時間不*,對競爭法及定量檢測影響很大,不注意可能會導致錯誤結(jié)果或定量不準。
4.洗滌是ELISA操作過程中決定實驗成敗的一個關(guān)鍵步驟。目的是除去未結(jié)合的免疫反應物,終止抗原抗體反應,除去標本中與反應無關(guān)的成分、游離的酶標物以及反應過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。可用洗板機洗板或手工洗板,前者洗滌質(zhì)量較好,各反應孔洗滌效果均一,批內(nèi)、批間差異小,手工洗板應注意控制各孔洗滌效果,差異不宜太大。
5.準確判定結(jié)果須使用ELISA測讀儀(酶標儀),比色法判讀可選擇單波長或雙波長,根據(jù)反應液顏色的不同選用不同波長的濾光片,以空白孔校零測定反應孔的吸光度值(A值)。酶標儀具有良好的重復性。
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