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南京科捷檢測科技發展有限公司
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閱讀：7627發布時間：2017-12-13
液相色譜法,采用顆粒十分細的固定相,并采用高壓泵輸送流動相,全部工作通過儀器來完成,這種新的儀器分析方法稱為液相色譜法。目前,HPLC在有機化學、生化、醫學、藥物臨床、化工、食品衛生、環保監測、商檢和法檢等方面都有廣泛的用途,而在生物和高分子試樣的分離和分析中更是風sao。在短短的三十多年里,HPLC從初創一下發展成為成熟而廣泛應用的分析方法,的確是化學*一件引人注目的事情。本文主要從液相色譜的應用范圍和操作步驟以及主要事項來更的解讀液相色譜儀！
一、液相色譜的應用范圍
1.分離混合物
液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。
通過與試樣預處理技術相配合，液相色譜法所達到的高分辨率和高靈敏度，可分離并同時測定性質上十分相近的物質，能夠分離復雜混合物中的微量成分。并且隨著固定相的發展，還可在充分保持生化物質活性的條件下完成對其的分離。
2.生化分析
由于液相色譜法具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域，并已成為解決生化分析問題zui有前途的方法。
3.儀器聯用
液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。液相色譜一質譜聯用技術受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農yao和多核芳烴等：液相色譜一紅外光譜聯用也發展很快，如在環境污染分析測定水中的烴類等．使環境污染分析得到新的發展
二、液相色譜的操作過程
1.過濾流動相，根據需要選擇不同的濾膜。
2.對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。
3.打開HPLC工作站（包括計算機軟件和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統。
4.進入HPLC控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。
5.有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進樣閥，需要在manual菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖洗時速度不要超過10?ml/min。
6.調節流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。
7.設計走樣方法。點擊file，選取select?users?and?methods，可以選取現有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊new?method。選取需要的配件，包括進樣閥，泵，檢測器等，根據需要而不同。選完后，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進樣前的穩流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進樣閥的loading-inject轉換；d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。
8.進樣和進樣后操作。選定走樣方法，點擊start。進樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點擊postrun，可記錄數據和做標記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。
9.填寫登記本，由負責人簽字。
三、液相色譜操作過程中注意事項：
1. 流動相均需色譜純度，水用20m的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。
2. 柱子是非常脆弱的，*次做的方法，先不要讓液體過柱子。
3. 所有過柱子的液體均需嚴格的過濾。
4. 壓力不能太大，不要超過2000 psi。
5. 因為緩沖試劑遇有機溶劑，會結晶，有損色譜柱，所以，每次由有機相變流動相或流動相變有機相均需用蒸餾水清洗。
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