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信帆生物
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)檢測試劑盒原來可以檢測植物樣本

時(shí)間:2019/2/13閱讀:2856
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β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)檢測試劑盒原來可以檢測植物樣本

測定意義:                          
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆境條件下,可誘導(dǎo)細(xì)胞大量合成β-1,3-GA,因此β-1,3-GA活性測定廣泛應(yīng)用于植物病理和逆境生理研究。


測定原理:
β-1,3-GA水解昆布多糖,內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵,產(chǎn)生還原末端,通過測定還原糖生成速率來計(jì)算其酶活性。

 

產(chǎn)品內(nèi)容: 提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前每瓶加入 3.5mL 雙蒸水,充分溶解待用;

試劑二:液體 30mL×1 瓶,4℃保存; 標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 支,4℃保存,含 10mg 無水葡萄糖(干燥失重<0.2%),臨用前加入 1ml 蒸餾 水溶解,配制成 10mg/ml 葡萄糖溶液備用,4℃可保存 1 周,或者用飽和苯甲酸溶液溶解,可保存 更長時(shí)間。

標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至 1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。

產(chǎn)品說明: β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆 境條件下,可誘導(dǎo)細(xì)胞大量合成β-1,3-GA,因此β-1,3-GA 活性測定廣泛應(yīng)用于植物病理和逆境生理 研究。 β-1,3-GA 水解昆布多糖,內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵,產(chǎn)生還原末端,通過測定還原糖生成速率來 計(jì)算其酶活性。

自備儀器和用品: 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰 和蒸餾水。

操作步驟:

一、粗酶液提?。?稱取約 0.2g 組織,剪碎,放入預(yù)冷的研缽中,加入 1.0 mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿,12000g,4℃, 離心 10min,取上清,置冰上待測。

二、測定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 540nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定,(在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑): (見說明書)

取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中, 540nm 處記錄各管吸光值 A,如果吸光值大于 2, 可以用蒸餾水稀釋后測定,ΔA=A 測定-A 對(duì)照。

β-1,3-GA 活性計(jì)算:

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管吸光度(x)和濃度(y,mg/ml)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA 帶入公式中計(jì)算出樣品中產(chǎn) 生的還原糖的含量 y 值(mg/ml)

(1) 按蛋白濃度計(jì)算 單位的定義:每 mg 組織蛋白每小時(shí)產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。 β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算 單位的定義:每 g 組織每小時(shí)產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。 β-1,3-GA(U /g 鮮重)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)=y ÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算 單位的定義:每 1 萬個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌每小時(shí)產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。 β-1,3-GA(U /g 鮮重)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.035mL;V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度, mg/mL;W:樣本鮮重g。

β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)檢測試劑盒原來可以檢測植物樣本

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