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信帆生物
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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乙醇酸氧化酶(GO)提取液的實(shí)驗(yàn)方法及注意事項(xiàng)

時(shí)間:2019/5/6閱讀:2650
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   乙醇酸氧化酶(Glycolate oxidase,GO)是乙醇酸循環(huán)的一種酶,在乙醇酸代謝循環(huán)中乙醇酸通過(guò)乙醇酸氧化酶的作用而變成乙醛酸。光合作用與呼吸作用是植物代謝的兩大核心內(nèi)容,前者是物質(zhì)合成與能量?jī)?chǔ)存過(guò)程,屬于同化作用,為包括人來(lái)在內(nèi)的幾乎所有生物的生存提供物質(zhì)來(lái)源和能量來(lái)源;后者是物質(zhì)分解與能量釋放過(guò)程,屬于異化作用,為生命提供能量。通過(guò)測(cè)定樣品中乙醇酸氧化酶活性,了解植物的光合和呼吸代謝的基本方法。
   乙醇酸氧化酶(GO)提取液主要用于提取植物組織或果實(shí)中乙醇酸氧化酶。該試盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于診斷或其他用途。
操作步驟(僅供參考):

1、取新鮮植物葉片,清洗干凈,吸水紙吸干,加入預(yù)冷的GO Lysis buffer,冰浴情況下充分勻漿或研磨,經(jīng)紗布或?yàn)V紙過(guò)濾,將濾液置于離心管或試管。

2、離心,取上清液置于新的離心管或試管,調(diào)節(jié)pH 值,離心,取上清液。

3、不斷混勻,離心,取上清液。

4、不斷混勻,離心,棄上清液,留取沉淀即為乙醇酸氧化酶粗制品。

5、加入適量的GO懸浮液溶解沉淀,使其體積為開(kāi)始提取液體積的1/10,即為乙醇酸氧化酶粗提液,保存待用。可考慮采用BCA蛋白定量法等檢測(cè)乙醇酸氧化酶粗提液中蛋白質(zhì)的濃度。
注意事項(xiàng):

1、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮,如取材后不立即使用,應(yīng)存于-20~-80℃。

2、如果沒(méi)有分光光度計(jì),也可以使用普通的酶標(biāo)儀測(cè)定,但應(yīng)考慮酶標(biāo)儀的大檢測(cè)體

積。

3、所測(cè)樣本的濃度過(guò)高,應(yīng)用乙醇酸氧化酶(GO)提取液稀釋樣品后重新測(cè)定。

4、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期:12個(gè)月有效

   信帆生物秉承“誠(chéng)信、合作、創(chuàng)新”、“以客戶價(jià)值為導(dǎo)向,創(chuàng)造增值性的服務(wù)”的經(jīng)營(yíng)理念,立足于為提供客戶更好的產(chǎn)品和服務(wù),同時(shí),可為客戶度身定制,調(diào)配個(gè)性特色的產(chǎn)品,滿足您的需求。

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