信帆生物銷售抗壞血酸氧化酶（ascorbate oxidase，AAO）*

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測定意義：
AAO是定位于植物細胞壁的糖蛋白，屬“藍銅氧化酶”家族。細胞壁內(nèi)的抗壞血酸和AAO與細胞壁的代謝和生長有著密切的關(guān)系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通過質(zhì)膜上的細胞色素b還原，該過程中電子的跨膜運輸能夠促進細胞生長。
測定原理：
AAO可直接氧化AsA，通過測定AsA的氧化量，可計算得AAO活力。
實驗中所需儀器及設(shè)備：
低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器、研缽、冰、蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入2mL蒸餾水充分溶解。
粗酶液提取：
稱取約0.1g樣品，加試劑一1 mL，冰上充分研磨，16000 g 4℃離心20min，取上清液待測。
AAO測定操作：
1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到265 nm。
2. 試劑二在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸餾水、170μL預(yù)熱的試劑二和10μL試劑三，迅速混勻后在265nm測定10s和130s光吸收。
4.4. 測定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、170μL預(yù)熱的試劑二和10μL試劑三，迅速混勻后在265nm測定10s和130s光吸收。

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