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革蘭氏染色液的染色方法和實驗原理您清楚多少?

時間:2020/7/28閱讀:3023
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革蘭氏染色液的染色方法和實驗原理您清楚多少?

信帆生物供應革蘭氏染色液,產品備有大量現貨,質量穩定,歡迎大家咨詢!下面讓我們一起來看看這個產品的染色原理和染色方法吧!

革蘭氏染色主要用來區分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。先來介紹一下這個實驗原理:

因為革蘭氏陽性菌的細胞壁較厚,肽聚糖網層較厚且交聯致密,沒有類脂存在,而革蘭氏陰性菌的細胞壁薄,肽聚糖網層薄且交聯較差,外膜上存在較多的類脂。兩者的這些區別造成了在進行革蘭氏染色后出現不同染色結果。

革蘭氏陽性菌:當結晶紫染液和碘液相遇后,形成不溶性的有色復合物,當用乙醇脫色時,因為胞體的失水,而使得肽聚糖交聯更加緊密,網孔縮小,把紫色復合物截留在細胞內,從而使細胞呈現紫色;而革蘭氏陰性菌與乙醇脫色時,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖網不能截留形成的紫色復合物,所以呈現無色,再經沙黃復染后呈現紅色。

革蘭氏染色方法:

1、涂片:利用移液槍吸取10ul的菌液滴在載玻片,用燒紅的涂菌棒涂抹均勻,面積適中。

2、干燥與固定:將載玻片放置在酒精燈火焰上方一定距離處,涂菌面向上,將菌液烤干,溫度不宜過高,炙烤不宜時間太長,固定就是將涂菌面向上,載玻片快速在火焰中過2-3次。

3、初染:在菌液面上滴加1-2滴草酸銨結晶紫,染色1min

4、水洗:在小股水流下沖洗,直至無色為止。

5、媒染:吸取300ul碘液滴在樣本上,染色1min。

6、水洗:在小股水流下沖洗,直至無色為止。

7、脫色:傾斜玻片,滴加95%的乙醇,約30s,再水洗一次。

8、復染:在樣本上滴加沙黃染液1-2滴,染色1min。

9、水洗:在小股水流下沖洗,直至流過玻片的水無色為止。

10、干燥與觀察:用紙擦去水,干燥后在顯微鏡下觀察,菌體呈現紫色的是革蘭氏陽性菌,呈現紅色的是革蘭氏陰性菌。

 

革蘭氏染色液的染色方法和實驗原理您清楚多少?

 

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