信帆生物歡樂知識(shí)大講堂開課啦！石蠟切片常見問題解析！

大家都清楚樣本的制備是IHC實(shí)驗(yàn)成功的前提條件。樣本完成石蠟包埋后，需要成約3-4um的薄片。本文主要介紹了切片小技巧及過程中容易出現(xiàn)的幾種問題？

切片小技巧

① 組織切片，舊刀修片，新刀切片。

②切片厚度3-4μm（淋巴結(jié)、扁桃體、鼻咽、扁桃體2-3μm；脂肪5-6μm）

④切片動(dòng)作輕，用力均勻。

⑥刀片鋒利，切片角度5°佳，切片平整無褶皺和收縮。

⑧蠟塊表面有鈣點(diǎn)，應(yīng)20%HCL表面泡1-2h，水洗后切。

切片光面朝下展片、撈片。

?攤片水溫利于展平又不熔化，必要時(shí)用20%酒精攤片。

?細(xì)小組織（穿刺、內(nèi)鏡小標(biāo)本）可以多貼幾個(gè)。

?在烘烤切片前應(yīng)做好排水，烤片溫度高于石蠟熔點(diǎn)5-10℃。

問題1 細(xì)胞皺縮和收縮；核“起泡”變大損傷；膠原染色嗜堿性

原因：石蠟溫度過高。

解決方法：烤箱溫度高于石蠟熔點(diǎn)5-10℃為佳。

問題2 切片卷成致密團(tuán)

原因：①刀鈍；②傾斜角太小；③切片太厚。

解決方法：①換新刀片；②如果間隙角充分，降低傾刀的斜度。

問題3 切片破碎或切不成片 

①組織固定、脫水、透明不*，浸蠟不透；浸蠟包埋溫度過高或時(shí)間過久。

解決方法：①優(yōu)化組織處理；②及時(shí)更換試劑；③重新脫水補(bǔ)救；或者重取。

 問題4  切片不連片

原因：刀刃不鋒利，刀間隙角度大；蠟塊內(nèi)組織上下端留蠟邊太少或不整齊，刀邊碎片；室溫過低或石蠟過硬。

移動(dòng)刀口或更換刀片，檢查刀的角度，清潔刀片和刀架背面；在低熔點(diǎn)的石蠟中重新包埋；提高室內(nèi)溫度或溫暖蠟塊表面（哈氣等）；切片厚度適宜（根據(jù)組織類型）。

 問題5  組織切片不完整，缺損

①取材時(shí)未取中病灶，組織塊太大，太厚；③組織塊內(nèi)組織不平坦；⑤切片時(shí)粗修過多（切削過深）或過少（沒切到足夠的深度）。

解決方法：②組織在包埋模中均勻鋪平；④切片方向：軟到硬，易到難，主到次。

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