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信帆生物
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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用于檢測(cè)液體樣本的甘油含量檢測(cè)試劑盒等您來(lái)了解!

時(shí)間:2020/9/27閱讀:1554
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用于檢測(cè)液體樣本的甘油含量檢測(cè)試劑盒等您來(lái)了解!

信帆生物供應(yīng)液體樣本甘油檢測(cè)試劑盒,產(chǎn)品適用于測(cè)定血液、細(xì)胞培養(yǎng)基、體液、酒類(lèi)飲料中的甘油濃度,產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,現(xiàn)貨充足!

描述:甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯;胰脂酶可以水解食 物中的甘油三酯;激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪細(xì)胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣,甘 油含量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測(cè)指標(biāo),但檢測(cè)更方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法 和經(jīng)典 GPO-Trinder 酶學(xué)反應(yīng)相結(jié)合的方法,通過(guò)比色法測(cè)定液體樣本中的甘油含量。經(jīng)過(guò)優(yōu) 化后,操作步驟更加簡(jiǎn)單,檢測(cè)線性范圍在 10-1200µmol/L,可靠性和重復(fù)性俱佳,適合生物 醫(yī)學(xué)、食品實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

1.Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.

2.Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145

ATP 3-產(chǎn)過(guò)氧 化氫;在過(guò)氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺,其光密度值與甘油濃度成正比。

適用范圍:測(cè)定血液、細(xì)胞培養(yǎng)基、體液、酒類(lèi)飲料中的甘油濃度。

R1 試劑 20 ml R2 試劑 5 ml

4 mmol/L 甘油標(biāo)準(zhǔn)品 1 ml

4 ºC,儲(chǔ)存6 個(gè)月。

所需設(shè)備:酶標(biāo)儀、生化分析儀或 721722 型可見(jiàn)光分光光度計(jì)。佳工作波長(zhǎng) 550nm,如 無(wú)此波長(zhǎng)建議優(yōu)先選用 570nm、次選 530490nm

操作步

一、樣本處

  1. 酒類(lèi)、飲品、清澈液體樣本:可直接進(jìn)行測(cè)定,如超過(guò)線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后 再測(cè)定。

2培養(yǎng)無(wú)無(wú)細(xì)養(yǎng)基細(xì)應(yīng) 4ºC,12,000g 5min,取上清進(jìn)行測(cè)定。

3凝血4ºC2,000g 5min 漿4ºC 2h 2000g 10min,細(xì)漿/70ºC 10 內(nèi)肪酶12,000g 離心 10min ,取上清測(cè)定或-20ºC 保存。

工作溶液配制: 4:1 比例,取 4 ml 試劑 R1 1 ml 試劑 R2 混合,立即使用或 4ºC 保存

<1 天,變色棄去。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?zhuān)?/span>用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體,將 4 mM 甘油標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀 釋為 100050025012562.531.2515.6257.8125 µmol/L,通常取其中 4~6 管即可, 注意設(shè)置 0 濃度對(duì)照反應(yīng)管

四、 甘油濃度測(cè)定:

1參見(jiàn)下表進(jìn)行加樣。為使反應(yīng)時(shí)間盡量一致,減小實(shí)驗(yàn)誤差,可先加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品,然后再加入工作溶液。(注意:當(dāng)甘油濃度較低時(shí),可將待測(cè)樣品與工作溶液按照 100µl:100µl體積混合,然后再進(jìn)行測(cè)定,但是如果樣品體積超過(guò)100µl時(shí)將會(huì)稀釋工作液中酶的濃度,使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測(cè)樣品濃度超過(guò)線性范圍,可進(jìn)行適當(dāng)稀釋?zhuān)缓蟾鶕?jù)稀釋倍數(shù)來(lái)計(jì)算樣品中甘油濃度。)

237ºC 或 25ºC 反應(yīng) 15 分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在 60 分鐘定。 3先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零,然后測(cè)定各管 OD 值。

4繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算甘油濃度。

附 Excel 作圖步驟:各標(biāo)準(zhǔn)管 OD 值為 y 軸,標(biāo)準(zhǔn)品濃度為 x 軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù),點(diǎn)擊做圖向?qū)Вx擇-散點(diǎn)圖-,點(diǎn)擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一點(diǎn),點(diǎn)擊-添加趨勢(shì)線-,點(diǎn)擊-選項(xiàng)-,點(diǎn)擊-顯示公式-和-R2 值-。 

表一:

酶標(biāo)微板測(cè)定的加樣比例(檢測(cè)范圍  10-1200µmol/L

(可對(duì)樣品和工作液比例進(jìn)行微量調(diào)整)

 

低濃度甘油樣品測(cè)

高濃度甘油樣品測(cè)定

 

空白管

標(biāo)準(zhǔn)品

樣本管

空白管

標(biāo)準(zhǔn)品

樣本管

蒸餾水µl

50

 

 

5

 

 

標(biāo)準(zhǔn)品µl

 

50

 

 

5

 

樣品µl

 

 

50

 

 

5

工作液µl

150

150

150

195

195

195

 

 

表二:

1 ml 比色杯測(cè)定的加樣比例(檢測(cè)范圍 10-1200µmol/L

 

低濃度甘油樣品測(cè)

高濃度甘油樣品測(cè)定

 

空白管

標(biāo)準(zhǔn)品

樣本管

空白管

標(biāo)準(zhǔn)品

樣本管

蒸餾水µl

200

 

 

50

 

 

標(biāo)準(zhǔn)品µl

 

200

 

 

50

 

樣品µl

 

 

200

 

 

50

工作液µl

600

600

600

750

750

750

 

說(shuō)明:

1維生素  C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度  EDTA干擾測(cè)試。

2、正常血清甘油濃度為20-130µmol/L,細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)須用不含酚紅的無(wú)色無(wú)血清培養(yǎng)基,如果 培養(yǎng)基中含有酚紅,可以選擇含有酚紅的無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基作為對(duì)照上海

 

用于檢測(cè)液體樣本的甘油含量檢測(cè)試劑盒等您來(lái)了解!

 

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