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丙酮酸激酶(PK)試劑盒的檢測原理和試劑組成

時間:2015-6-23閱讀:1380
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信帆生物科技有限公司代理銷售“丙酮酸激酶(PK)試劑盒",現貨供應,歡迎!
丙酮酸激酶(Pyruvatekinase,PK)試劑盒
一、 測定意義
丙酮酸激酶酶催化糖酵解過程中的zui后一步反應,是糖酵解過程中的主要限速酶之一,也是動植物組織中產生ATP的關鍵酶之一,因此測定動植物組織中PK的活性具有重要意義。
二、 測定原理
在二磷酸腺昔(ADP)存在的條件下丙酮酸激酶能夠催化磷酸烯醇丙酮酸(PEP)轉化成丙酮酸,丙酮酸與2, 4 -二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,后者在堿性溶液中顯棕 紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比,由此計算丙酮酸激酶活力。三、試驗中所需的儀器和設備 可見分光光度計或酶標儀、37℃恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿或酶標板、蒸餾水
四、試劑的組成和配制
試劑一:粉劑×1瓶,常溫保存,用時加入50mL雙蒸水溶解,4℃保存3個月;試劑二:液體13 mL×1瓶,4℃保存3個月; 試劑三:粉劑×1支,常溫保存;用時加1mL雙蒸水充分溶解;試劑四:粉劑×1支,-20℃保存;用時加1.2 mL雙蒸水充分溶解;試劑五:粉劑×1支,-20℃保存;用時加550μL雙蒸水充分溶解;試劑六:2 mmol/L標準液母液1mL,-20℃保存1個月;試劑七:儲備液15 mL,4℃避光保存3個月; 試劑八:終止試劑50 mL,4℃保存3 個月;
五、粗酶液的提取
準確稱取組織重量,按重量體積比(g/mL)加9 倍試劑一,制成10%勻漿。8000g/min 離心10 min,取上清液待測,同時測定組織蛋白含量。

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