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細胞核蛋白和胞漿蛋白制備試劑盒

參  考  價:面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 型號

  • 品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海

更新時間:2025-02-10 08:27:23瀏覽次數(shù):807次

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細胞核蛋白和胞漿蛋白制備試劑盒
本試劑盒用于從哺乳動物組織和培養(yǎng)細胞中提取核蛋白或胞質(zhì)蛋白,提取制備過程簡便。制備的核蛋白和胞漿蛋白能保持天然活性,并且純度較高。提取的蛋白特別適于轉(zhuǎn)錄因子活性分析、凝膠阻滯實驗(gel shift assay, EMSA)、免疫共沉淀、酶活性測定,也適于 Western Blot 實驗。

所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等

細胞核蛋白和胞漿蛋白制備試劑盒

操作步驟:

1. 裂解(1) 培養(yǎng)細胞,PBS洗滌細胞兩次,根據(jù)細胞計數(shù),或者估計離心后的細胞體積PCV。每1 ×106個細胞加入50~100ul的CEB-A,刮下細胞轉(zhuǎn)移至預冷的1.5ml離心管;或者每體積PCV細胞加入5倍PCV體積的CEB-A (即10~20 ml PCV的細胞加50~100ul的CEB-A),劇烈振蕩重懸。

裂解: (2) 組織樣本,精確稱重后剪成小塊,PBS洗滌。通常每10 mg動物組織相當于1×106個細胞,需加入50~100ulCEB-A,參照上表按比例加入。在冰上使用玻璃勻漿器勻漿組織,通常需要20~40次上下抽動勻漿,棄去筋膜組織。切記勿用高速電動勻漿器或超聲破碎組織避免破壞細胞器結(jié)構(gòu)。

2.  裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至預冷的1.5ml離心管,劇烈振蕩30秒,冰浴10~15min,期間每5分鐘振蕩15秒。

3. 可選步驟:根據(jù)步驟2裂解物體積,加入1/20體積的CEB-B,振蕩10秒,冰浴1min (加入CEB-B可去除部分核膜蛋白,適于制備高純度的核蛋白用于EMSA凝膠阻滯實驗等,但可使胞漿蛋白出現(xiàn)很少量的膜蛋白污染。若制備高純度胞漿蛋白可跳過此步驟。若制備核蛋白僅用于普通的Western Blot目的,則無須高純度核蛋白,也可省略此步驟。

4.  胞漿蛋白組分的制備:將步驟2或步驟3的上清,12000g 4 oC離心5min,勿觸動沉淀,將上清轉(zhuǎn)移到新管,此即胞漿蛋白組分,可立即使用或−20~−70ºC保存。

5. 胞核粗提組分的制備:取第步驟4的原離心管,12000g 4 oC瞬時離心,盡量吸除上清,保留沉淀。加入100μl CEB-A和5μl  CEB-B,振蕩10秒,重懸沉淀,冰浴1min,1000g 5min,棄上清。再次加入100μl CEB-A和5 μl CEB-B重懸沉淀冰浴1min,1000g 5min,盡棄上清,保留沉淀。

6.   胞核蛋白的制備:加50~100μl預冷NEB重懸步驟5的離心沉淀,劇烈振蕩15秒,冰上30min,期間每10 min振蕩15秒。12000g 5min,上清液含核蛋白成分,其中含有25%的甘油;可立即使用或−20~−70ºC保存。

 

細胞核蛋白和胞漿蛋白制備試劑盒

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