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升級版線粒體提取試劑盒(組織和細胞通用)

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具體成交價以合同協議為準
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  • 所在地

    上海

更新時間:2025-02-10 08:38:11瀏覽次數:662次

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升級版線粒體提取試劑盒(組織和細胞通用)
線粒體(mitochondrion)是一種存在于大多數細胞中的由兩層膜包被的細胞器,是細胞中制造能量的結構,是細胞進行有氧呼吸的主要場所,被稱為“power house“

所有產品僅供科研使用,不能用于食用和醫療等

升級版線粒體提取試劑盒(組織和細胞通用)

線粒體(mitochondria)是真核細胞中產生能量的重要細胞器。細胞中的能源物質—脂肪、糖、部分氨基酸在此進行氧化,并通過偶聯磷酸化生成ATP,供給細胞生理活動之需。對線粒體結構與功能的研究通常是在離體的線粒體上進行的,本試劑盒用簡便快速的方法即可在40 分鐘內提取得到線粒體。

操作步驟:

1. 樣本處理 a. 組織勻漿:稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS或生理鹽水沖洗,洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內。加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer,0℃冰浴上下研磨組織20次; b. 培養細胞勻漿:消化細胞,PBS洗滌,800g離心5~10 min收集細胞,計數。每次提取需要5×107個細胞,加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞,將細胞懸液轉移到小容量玻璃勻漿器內,0℃冰浴研磨30~40次。

2. 將組織或細胞勻漿物轉移到離心管,4℃,1000g 離心5 min。

3. 取上清,轉移至新的離心管中,4℃,1000g再次離心5 min。

4. 取上清,轉移至新的離心管中,4℃, 12,000 g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分,可從中提取胞漿蛋白。將上清轉移到新離心管,線粒體沉淀在管底。

5. 往線粒體沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀,4℃,1000 g 離心5 min。

6. 取上清,轉移至新的離心管中,4℃, 12,000 g 離心10 min。棄上清,高純度的線粒體沉淀在管底。

7. 50 -100μL Store Buffer 或合適的反應緩沖液重懸線粒體沉淀,立即使用或-70℃保存。

注意事項:

1. 為保證獲得完整的線粒體,務必做到:,全程低溫操作;第二,快速;第三,在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞,這是制備線粒體的關鍵環節。與組織塊相比,培養細胞特別是貼壁培養細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁,因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴密的研杵上下研磨培養細胞。

2. 以離心力g計算正確的離心速度,不同的離心機可據此精確計算離心速度。3. 進行Western Blot2D-膠電泳,可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。 轉速與離心力換算:     G1.11×(10-5)×R×[rpm] G為離心力,一般以g(重力加速度)的倍數來表示; [rpm]即:轉速的平方; R為半徑,單位為厘米。

 

 

升級版線粒體提取試劑盒(組織和細胞通用)

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