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膠立染(考馬斯亮藍染色液替代品)
考馬斯亮藍有G-250和R-250兩種。
游離狀態的考馬斯亮藍G250 在酸性溶液中呈紅褐色,與蛋白質結合后呈藍色,蛋白質含量與顏色的深淺成正比,經595nm 測定,可作出蛋白質含量與吸光度值的標準曲線,并求出未知樣品的蛋白質濃度。
蛋白質與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內達到平衡,完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h內保持穩定。該法是1976年Bradford建立,試劑配制簡單,操作簡便快捷,反應非常靈敏,靈敏度比Lowry法還高4倍,可測定微克級蛋白質含量,測定蛋白質濃度范圍為0~1 000μg/mL,是一種常用的微量蛋白質快速測定方法。
考馬斯亮藍有G-250和R-250兩種。其中考馬斯亮藍G-250由于與蛋白質的結合反應十分迅速,常用來作為蛋白質含量的測定。考馬斯亮藍R-250與蛋白質反應雖然比較緩慢,但是可以被洗脫下去,所以可以用來對電泳條帶染色。
該方法用于大多數蛋白質的定量是比較精確的,但不適用于小分子堿性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0.2%影響測定結果,如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于細胞骨架的檢驗。
膠立染(考馬斯亮藍染色液替代品)
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