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活性氧ROS檢測試劑盒(綠色熒光)
1. 本試劑盒特別適用于貼壁細胞和懸浮細胞活性氧的檢測。對于動物組織樣本而言,應盡量選擇新鮮組織,勻漿操作應盡量快速,以減少實驗誤差,如果樣本已經凍存,則無法保證檢測結果的可靠性。
2. DCFH-DA可稀釋于培養基或緩沖液中。血清或培養基的顏色并不會影響DCFH-DA及細胞內熒光的產生,但可能會影響熒光顯微鏡觀察,干擾熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀的熒光測定。如果用上述儀器進行測定時,可將DCFH-DA稀釋于無酚紅培養基或適宜的緩沖液如PBS中。
3. 加入DCFH-DA的時機和孵育時間,以至能順利檢測細胞內活性氧為目的。當細胞藥物處理時間較短(如<2 小時)或預計ROS效應較弱時,可將DCFH-DA在藥物處理之前或者與藥物同時加入到細胞培養基中;反之,當藥物處理時間較長(如>6小時)或預計產生ROS效應較強時,可將DCFH-DA在藥物處理之后再加入。
4. 活性氧供體內含高純度12 mM 的H2O2。加入細胞后可使DCFH-DA氧化為DCF呈現強綠色熒光。該試劑的細胞工作濃度為20-100 µM或更低濃度,當其濃度超過200µM時,將產生細胞毒性。如果用戶熟悉ROS熒光或實驗沒有必要采用陽性對照,可以不加該試劑。一般情況下,活性氧供體加入到細胞30min左右即可產生明顯的綠色熒光。
活性氧ROS檢測試劑盒(綠色熒光)
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