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TRIzol(總RNA提取試劑)
Trizol的顏色和TRIzol相同,加入氯反后上層呈無色,下層呈紫紅色,便于吸取上層水相。
Trizol對動植物細胞或組織及細菌的總RNA抽提均適用。
Trizol可以抽提長達15 kb的RNA,也可以抽提microRNA等小RNA。抽提小RNA時宜-70℃沉淀過夜。
Trizol抽提所得RNA無DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值為1.8-2.0。
裂解細胞或和組織共勻漿時,Trizol可以保持樣品中RNA的完整性,即可以有效抑制RNA的降解。
每一百萬細胞用Trizol抽提可得5-15μg RNA;每毫克組織用Trizol抽提可得1-10μg RNA。產量因細胞和組織不同而異。
抽提兩個樣品約需一小時。
Trizol抽提所得RNA可直接用于Northern,點雜交,純化mRNA,體外翻譯,RNase protection assay,cDNA克隆,以及RT-PCR;也可以用于基因表達芯片分析、高通量測序(deep sequencing)等對RNA質量要求較高的情況。
使用凍存的細胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細胞或組織差一些。因為在細胞或組織凍融過程中一些細胞或組織內的RNase會被釋放出來并剪切樣品。如果不能及時抽提RNA,先加入適量Trizol,并裂解樣品后凍存。
必須戴一次性手套操作,且盡量不要對著RNA樣品呼氣或說話,以防RNA酶污染。建議戴一次性kou zhao操作。
TRIzol(總RNA提取試劑)
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