谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT/GPT）測(cè)試盒（比色法）

（貨號(hào):C009-1-1 比色法）

一、測(cè)定原理：

谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）在 37℃及 PH7.4 條件下，作用于丙氨

酸及α-酮戊二酸組成的底物，生成丙酮酸及谷-氨-酸。反應(yīng) 30min

后（固定時(shí)間）加入 2,4-二硝基苯肼（DNPH）鹽酸溶液，既中

止反應(yīng)，同時(shí) DNPH 與酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙

在堿性條件下呈紅棕色，于 505nm 比讀吸光度并計(jì)算酶活力。

二、試劑的組成與配制：(100 管/50 樣)

試劑一:谷丙轉(zhuǎn)氨酶基質(zhì)液，50mL×1 瓶，4℃冰箱保存 6 個(gè)月；

試劑二:2,4—二硝基苯肼液，50mL×1 瓶，4℃冰箱保存 6 個(gè)月；

試劑三:4mol/L 氫氧化鈉液，50mL×1 瓶，室溫密封保存 6 個(gè)月；

0.4mol/L 氫氧化鈉液的配制：臨用時(shí)按 4mol/L 氫氧化鈉液：雙

蒸水=1∶9 的比例稀釋，需多少配多少，室溫密封保存。

試劑四:2mmol/mL 丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液 1 支，4℃冰箱保存 6 個(gè)月；

試劑五:0.1mol/L 磷酸鹽緩沖液 1 支，4℃冰箱保存 6 個(gè)月。

三、操作過程：

1、血清及細(xì)胞培養(yǎng)液的測(cè)定：直接取樣進(jìn)行測(cè)定。

四、注意事項(xiàng)：

1、比色法中常用的有賴氏（Reitman-Frankel）法及金氏（King）

法。賴氏法標(biāo)準(zhǔn)曲線所定單位數(shù)，是用實(shí)驗(yàn)方法和卡門氏分

光光度法（速率法）作對(duì)比測(cè)定求得的。以卡門氏單位報(bào)告

結(jié)果，比較準(zhǔn)確。卡門氏單位定義為：1mL 血清，反應(yīng)液總

容量 3mL，波長(zhǎng) 340nm，1cm 光徑，25℃，1min 內(nèi)所生成的

丙酮酸，使 NADH 氧化成 NAD+而引起吸光度每下降 0.001

為一個(gè)單位（1 卡門氏單位=0.482 IU/L，25℃）。

2、一般血清標(biāo)本內(nèi)源性丙酮酸很少，個(gè)體相差也不大，作大

批標(biāo)本測(cè)定時(shí)，不需每份標(biāo)本都作對(duì)照管，嚴(yán)重脂血、黃疽、

溶血及陳舊血清須作自身對(duì)照管。建議對(duì)活力單位超過正常

尤其是在臨界時(shí)，進(jìn)行復(fù)測(cè)；復(fù)測(cè)時(shí)每份標(biāo)本均作對(duì)照管。

3、酶活力超過 150 單位時(shí)，用鹽水稀釋血清后重測(cè)。

4、應(yīng)將一般血清的對(duì)照管（或稱標(biāo)本空白管）的吸光度作為

日常質(zhì)控的指標(biāo)之一；如相差大，可考慮α-酮戊二酸濃度、

DNPH 濃度及儀器等原因引起。

5、血清中 ALT 在室溫（25℃）可保存 2 天，在 4℃可保存一

周，在-25℃可保存 1 個(gè)月。

附錄Ⅰ：ALT 標(biāo)準(zhǔn)曲線

1、操作表

【注】：標(biāo)準(zhǔn)曲線需要客戶自己制作才更準(zhǔn)確，操作步驟參照上

表；上表所列的卡門氏單位數(shù)值與各標(biāo)準(zhǔn)孔的標(biāo)準(zhǔn)品加

樣量是對(duì)應(yīng)的，所以該值固定不變，客戶可以由此值和

自己按操作表求得的各標(biāo)準(zhǔn)孔的吸光值作多項(xiàng)式曲線

（R 2≥0.99），得到計(jì)算公式用于樣本計(jì)算。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT/GPT）測(cè)試盒（比色法）