產品說明 該勻相檢測法只需將一種工作試劑加至細胞培養液中，培養后即可測定熒光強度（激發波長= 530 - 570 nm，發射波長= 590 - 620 nm）。CellQuanti-BlueTM試劑，與其它基于刃天青的檢測法（如Alamar Blue試劑）相同，采用的是氧化還原顯色劑刃天青，刃天青本身并沒有熒光性，但一旦被具有代謝活性的細胞還原，則會轉化生成一種強熒光產物（試鹵靈）。活細胞很容易還原這種無毒試劑，從而使熒光強度升高，因此可用熒光分光光度計或熒光分析儀方便地檢測。非活性細胞沒有代謝能力，因此不能還原該顯色劑。所以檢測中觀察到的熒光強度能夠準確檢測活性細胞的數量。 本公司生產的CellQuanti-BlueTM試劑經優化處理，提高了敏感性、可重復性、穩定性。這種基于細胞的勻相檢測法可在多孔板中完成。該試劑與所有培養基以及所有液體處理系統都兼容，可在96孔板和384孔板中進行高通量篩選。適用范圍包括細胞增殖、細胞毒性和細胞凋亡。 產品特點 安全：非放射性檢測（參見3H-胸腺嘧啶核苷摻入法檢測）。 敏感且準確：可準確定量低至100個細胞。 ：采用96孔板和384孔板進行高通量檢測，每天可同時處理成千上萬的樣品。 勻相且簡單：只需加入一種試劑的“混合-培養-測量”型檢測法。無需沖洗或試劑移取步驟。 高通量：在96孔板和384孔板中觀察到的Z’系數通常為0.6-0.9。采用高通量篩選液體處理系統該檢測易于自動化。 適用范圍 細胞增殖: 細胞因子、生長因子和營養成分對活體細胞的影響。 細胞毒性和細胞凋亡: 評價有毒化合物、抗癌抗體、 毒素和環境污染物等。 藥物鑒定: 高通量篩選抗癌藥物。 試劑盒規格 目錄 # | 測試 | 試劑 | CQBL-05K | 5,000 | 50 mL | CQBL-10K | 10,000 | 100 mL | CQBL-HTS | >50,000 | 自定義 |
對照試劑（Cat # CTTX-050）：50 mg皂素（需單獨訂購）。 儲存條件：CellQuanti-BlueTM 試劑對光敏感，應在4°C下保存于試劑盒提供的棕色瓶內。對照試劑在-20°C下保存。保質期12個月。 預防措施：本產品僅供研究用。使用過程中應嚴格遵循實驗安全措施。 檢測步驟 CellQuanti-BlueTM檢測是基于具有代謝活性的細胞能將非熒光試劑轉化成熒光產物的原理。對大多數細胞而言，完成這種還原反應需要1至5小時。然后用熒光分析儀定量測定產物的熒光強度。雖然培養基大多含有酚紅，但酚紅并不會干擾檢測結果。技術要點中的所有數據都是在含有酚紅的培養基中測得的。 試劑制備: 注：使用前先將試劑放置至室溫。 | | 96孔板測定步驟： 1. 在黑色96孔組織培養板中培養細胞（80 mL）。典型的培養基含DMEM、10%胎牛血清和抗生素（*/*、*等）、氨基酸和其它營養物。不論是粘附細胞還是懸浮細胞，都可進行檢測。每孔的細胞數量可從100至80,000個之間不等。盡管本方案中使用80 mL，但培養體積可從50至150mL之間不等。除待測樣品外，還應設定對照孔，對照孔的培養基應不含細胞或細胞已經有毒試劑（如0.1%皂素）處理過。 2. 加入待測化合物和對照品，培養細胞至所需的時間（通常一整夜）。建議一式兩份或一式三份進行檢測。可將待測化合物和對照品（20 mL）加入到磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）或培養基中。用5 mLPBS（0.1%皂素）溶液方便地配制對照試劑。 3. 將CellQuanti-BlueTM 試劑放置至室溫。向每孔中加入10 mL該試劑（每100 mL 細胞培養液）。可根據細胞培養液的體積調整所加試劑的體積。輕敲孔板使細胞與試劑混合，在37°C下培養1至5小時。 4. 用熒光分析儀測量每孔的熒光強度。如果采用的是Molecular Devices LJL分析儀，則應使用若丹明濾光鏡（530nm激發濾片、590nm發射濾片和570nm分色鏡）。 384孔板測定步驟： 1. 在黑色384孔組織培養板中培養細胞（40 mL）。每孔的細胞數量可從100至20,000之間不等。盡管本方案中使用40 mL，但培養體積可從25至60mL之間不等。除待測樣品外，還應設定對照孔，對照孔中的培養基應不含細胞或細胞已經有毒試劑（如0.1%皂素）處理過。 2. 加入待測化合物和對照品，培養細胞至所需的時間。建議一式兩份或一式三份進行檢測。建議將10 mL體積的待測化合物加入到PBS溶液或培養基中。 3. 將CellQuanti-BlueTM 試劑放置至室溫。向每孔中加入5mL該試劑（每50 mL細胞培養液）。輕敲孔板使細胞與試劑混合，在37°C下培養1至5小時。 - 4. 用熒光分析儀測量每孔的熒光強度。如果采用的是Molecular Devices LJL分析儀，則應使用若丹明濾光鏡（530nm激發濾片、590nm發射濾片和570nm分色鏡）。
總則 培養時間：培養時間取決于細胞系。部分細胞系的代謝活性很強，因此其所需的培養時間比代謝活性稍弱的細胞系更短。可通過多次讀數輕松確定培養時間，如加入CellQuanti-BlueTM 試劑后每30分鐘讀取一次。一般來講，培養1至5小時就已足夠。當細胞數量很大時，培養時間過長（如 >18小時）可能導致非線性熒光響應。 細胞數量：一般來講，優化后的 CellQuanti-BlueTM 試劑會隨著培養細胞數量的增加表現出大范圍的線性熒光響應。建議測定信噪比zui高的各孔的細胞數量。細胞數量可根據細胞連續稀釋而輕松確定。 對照品：盡管不是必需程序，但可以設定陽性對照品，即有細胞毒性或可促進細胞增殖。皂素是一種有細胞毒性的試劑，可從本公司購買（參見技術要點圖2）。每次檢測都應使用空白對照品，即不含細胞或所含細胞已經0.1%皂素處理過的培養基。根據空白對照品可以確定背景熒光，數據分析時應扣除背景熒光。 |
