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337次因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復性亦佳。間接包被的另一優點是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可采用特殊。例如,在檢測抗DNA抗體時,動物ELISA試劑盒需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合??蓪⒕郾揭蚁┌逑冉涀贤饩€照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時),以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質,如聚賴氨酸、*等作預包被,也可提高核酸的結合力。也可用親和素*系統作間接包被,即用親和素先包被載體,然后加入*化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。
脂類物質無法與固相載體結合,可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,開蓋置冰箱過夜或冷風吹干,待酒精揮發后,讓脂質自然干固在固相表面。抗心磷脂抗體的動物ELISA試劑盒一般采用這種包被方式。
載體對不同蛋白質的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力,其聯結多發生在Fc段上,抗體結合點暴露于外,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。
蛋白質抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區域時,抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露,在這種情況下,直接包被效果不佳,動物ELISA試劑盒可以采用間接的捕獲包被法,即先將針對該抗原的特異抗體作預包被,其后通過抗原抗體反應使抗原固相化。
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